分子生物学服务

一、DNA抽提及纯化

根据客户要求，利用试剂盒，对动物（组织、细胞、血液等）、植物（各种组织）、微生物、病毒等进行DNA抽提及纯化。

提供结果：DNA、电泳图、OD值及定量结果（浓度及体积）。

二、RNA抽提及纯化

根据客户要求，利用试剂盒或自产试剂盒（主要针对特殊组织，如含次生代谢产物丰富的植物组织等），对动物（组织、细胞、血液等）、植物（各种组织）、微生物、病毒等进行RNA抽提及纯化。

提供结果：RNA、电泳图、OD值及定量结果（浓度及体积）。

三、mRNA分离及纯化

根据客户要求，利用Qiagen公司分离纯化试剂盒或国产分离纯化试剂盒，对总RNA进行mRNA的分离及纯化，以获得高质量的mRNA用于后续的建库等工作。

提供结果：mRNA、电泳图及定量结果（浓度及体积）。

四、PCR及纯化

根据客户要求，利用客户提供的样品及引物，进行批量PCR并进行产物纯化，包括前期的转化、铺板、挑菌、摇菌等工作，可提供全程服务。纯化建议采用millipore公司纯化板。

提供结果：PCR产物、电泳图及定量结果（浓度及体积）。

五、质粒抽提

根据客户要求，利用进口或国产试剂盒，对客户提供样品进行质粒小抽或大抽。为客户提供内毒素含量达到科研级和医药级的质粒DNA。

提供结果：质粒、实验报告（包括质粒电泳照片、鉴定结果及OD值测定结果）、1.7≤OD260/OD280≤2.0的质粒。

六、RT-PCR检测

RT-PCR是以RNA为起始材料经逆转录反应产生cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增以获取目的基因，用于检测细胞或组织中基因表达变化。

实验流程：包括RNA制备、RT反应、PCR反应等。

引物要求：由服务方设计并合成。如果客户提供，需提供引物序列；引物若为干粉，请提供引物的准确量；若为稀释液，请提供引物的zui终浓度（每个反应所需的引物满足以下要求：浓度≥10pm/μl，体积≥10μl）。

结果报告内容：电泳图谱及相关说明；实验流程。

七、载体构建

载体构建是将目的基因与载体连接并转化得到重组质粒的过程，客户需提供来源可靠的组织，细胞或血液以便用于目的基因的扩增。

1、原核表达载体的构建、诱导表达和蛋白纯化

实验过程：RNA抽提、RT-PCR、连接、转化、挑选阳性克隆、测序、诱导表达、蛋白纯化

提供结果：

（1）、提供测序报告*1份

（2）、PCR扩增电泳图片*1份

（3）、重组质粒菌种或者质粒（30ul）*1份

（4）、纯化后蛋白

（5）、实验报告*1份

2、真核表达载体的构建

实验过程：RNA抽提、RT-PCR、连接、转化、挑选阳性克隆、测序

提供结果：

（1）、提供测序报告*1份

（2）、PCR扩增电泳图片*1份

（3）、重组质粒菌种或者质粒（30ul）*1份

（4）、实验报告*1份

3、腺病毒载体构建及病毒包装服务

* 目的基因克隆载体的构建

实验过程：RNA抽提、RT-PCR、连接、转化、挑选阳性克隆、测序

提供结果：

（1）、提供测序报告*1份

（2）、PCR扩增电泳图片*1份

（3）、重组质粒菌种或者质粒（30ul）*1份

（4）、实验报告*1份

* 目的基因表达载体构建

实验过程：酶切，连接，转化，挑选阳性克隆，PCR鉴定，酶切鉴定

提供结果：

（1）、PCR鉴定图片*1份

（2）、酶切鉴定图片*1份

（3）、实验报告*1份

* 包装腺病毒

实验过程：酶切，共转染细胞，细胞培养，鉴定，纯化，测定浓度

提供结果：

（1）、实验报告*1份

（2）、转染后图片*1份

（3）、包装好的病毒*1份（滴度>5*107）

4、慢病毒载体构建及病毒包装服务

* 目的基因克隆载体的构建

实验过程：RNA抽提、RT-PCR、连接、转化、挑选阳性克隆、测序

提供结果：

（1）、提供测序报告*1份

（2）、PCR扩增电泳图片*1份

（3）、重组质粒菌种或者质粒（30ul）*1份

（4）、实验报告*1份

* 目的基因表达载体构建

实验过程：酶切，连接，转化，挑选阳性克隆，PCR鉴定，酶切鉴定

提供结果：

（1）、PCR鉴定图片*1份

（2）、酶切鉴定图片*1份

（3）、实验报告*1份

* 包装慢病毒

实验过程：酶切，共转染细胞，细胞培养，鉴定，纯化，测定浓度

提供结果：

（1）、实验报告*1份

（2）、转染后图片*1份

（3）、包装好的病毒*1份（检测滴度）

八、RNA干扰服务

近年来研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA（dsRNA）导入细胞，可以使mRNA发生特异性降解，导致其相应基因的沉默。

这种转录后基因沉默的机制（post-transcriptional gene silencing, PTGS）被称为RNA干扰（RNAi）：

1、siRNA的设计及合成，由客户自行设计，或由公司代为设计目前已证实的siRNA，以及阴性对照，并由DNA合成仪合成

2、构建RNAi干扰载体，PCR及测序鉴定

3、PCR检测mRNA表达以及western blotting检测蛋白的表达

提供结果：

1、PCR鉴定图片*1份

2、提供测序报告*1份

3、酶切鉴定图片*1份

4、RT-PCR电泳图*1份

5、western blotting结果*1份

6、实验报告*1份