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1 使用目的：

本试剂盒用于蔬菜、水果、相应食物、水及中毒残留物中除虫菊酯(Pyrethrins)残留的定

量检测。

2 实验原理

本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有除虫菊酯(Pyrethrins)偶联抗原，加入

除虫菊酯(Pyrethrins)标准品或样品，游离除虫菊酯(Pyrethrins)与微孔条上预包被的拟除虫菊

酯(Pyrethroids)偶联抗原互相竞争抗除虫菊酯(Pyrethrins)抗体酶标记物，用TMB底物显色，

加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中

除虫菊酯(Pyrethrins)含量成反比，通过标准曲线计算样品中除虫菊酯(Pyrethrins)的含量。  

3 试剂盒组成 

3.1 预包被的除虫菊酯(Pyrethrins)偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。

3.2除虫菊酯(Pyrethrins)标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ng/ml,

0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml。

3.3抗除虫菊酯(Pyrethrins)抗体酶结合物：1瓶（6ml）。

3.4显色液A：1瓶（6ml）。

3.5显色液B：1瓶（6ml）。

3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。

3.7*：1瓶（10×,  6ml），用于样品稀释用。

3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。

3.9说明书一份。

4 需要而未提供的材料

4.1 设备

4.1.1波长450nm酶标仪。 

4.1.2粉碎机。

4.1.3量筒。

4.1.4振荡器。

4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman 或相当的滤纸。

4.1.7微量移液器。

4.2 试剂

4.2.1去离子水或蒸馏水。

4.2.2 甲醇。

5 贮存

5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻

5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存

6 注意事项

6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

自然杀伤细胞(NK)ELISA试剂盒说明书

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6.2 不要使用过期试剂盒。

6.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。

6.4 标准品中含有除虫菊酯(Pyrethrins)，使用时应特别注意，操作时应带手套。

6.5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。

6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。

6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响

实验结果。

6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的*，否则会影响实验结果

6.9 混合试剂时应避免起泡。

7 工作液准备

7.1 除虫菊酯(Pyrethrins)标准品溶液：0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml

7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用

7.3 *：用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用

7.3 显色剂：已备用，避免光线直照

7.4 反应终止液：已备用

8 样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则

会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）

8.1取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液

8.2强力振荡3分钟

8.3用Whatman 滤纸过滤

8.4取25μl处理后的样品，加入25μl*于反应孔中（样本稀释倍数为2）

9 酶免分析步骤

9.1 实验须知

9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室

温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存

注：一定保证回温充分，否则影响检测的度和准确度。

9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存

9.1.3 请不要改变分析程序

9.1.4 请使用的微量移液器

9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序

9.1.6 ELISA结果的可重复性*程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作

9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样

9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面

9.2 分析步骤

9.2.1 预*行编号，标记B0、标准品和样品的位置，*进行双孔检测

9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存

9.2.3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)

9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液

9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液

9.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液

9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗除虫菊酯(Pyrethrins)抗体酶结合物

9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。 

9.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）

9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液