常染色体隐性遗传性耳聋59蛋白ELISA试剂盒说明书
本试剂仅供研究使用  标本：体液

常染色体隐性遗传性耳聋59蛋白ELISA试剂盒说明书试验原理：
BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和*标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。

常染色体隐性遗传性耳聋59蛋白ELISA试剂盒说明书自备材料
1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性
1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项
1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。

2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作步骤
1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

性能
1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的BFGF标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的BFGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml

 PAI-1  兔子纤溶酶原激活物抑制因子1  规格： 48T/96T

 PAI  兔子纤溶酶原激活物抑制因子  规格： 48T/96T

 ICAM-3/CD50  兔子细胞间粘附分子3  规格： 48T/96T

 ICAM-2/CD102  兔子细胞间粘附分子2  规格： 48T/96T

 ICAM-1/CD54  兔子细胞间粘附分子1  规格： 48T/96T

 DPD  兔子脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉  规格： 48T/96T

 DHEA-S  兔子脱氢表雄酮硫酸酯  规格： 48T/96T

 HA  兔子透明质酸  规格： 48T/96T

 MBP  兔子髓磷脂碱性蛋白  规格： 48T/96T

 RBP-4  兔子*结合蛋白4  规格： 48T/96T

 GHRP  兔子生长激素释放多肽  规格： 48T/96T

 ADM  兔子肾上腺髓质素  规格： 48T/96T

 NT-4  兔子神经营养因子4  规格： 48T/96T

 NT-3  兔子神经营养因子3  规格： 48T/96T

 NSE  兔子神经特异性烯醇化酶  规格： 48T/96T

 NGF  兔子神经生长因子  规格： 48T/96T

 GFAP  兔子神经胶质纤维酸性蛋白  规格： 48T/96T

 PGE2  兔子前列腺素E2  规格： 48T/96T

 PGE1  兔子前列腺素E1  规格： 48T/96T

 GIP  兔子葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽  规格： 48T/96T

 CORT  兔子皮质酮/肾上腺酮  规格： 48T/96T

 Cortisol  兔子*  规格： 48T/96T

 FⅡ  兔子*Ⅱ  规格： 48T/96T

 TR  兔子*受体  规格： 48T/96T

 BNP  兔子脑钠素/脑钠尿肽  规格： 48T/96T

 ES  兔子内皮抑素  规格： 48T/96T

 eNOS-3  兔子内皮型一氧化氮合成酶3  规格： 48T/96T

 ET-1  兔子内皮素1  规格： 48T/96T

 ET-1  兔子内皮素1  规格： 48T/96T

 IgM  兔子免疫球蛋白M  规格： 48T/96T

 IgG  兔子免疫球蛋白G  规格： 48T/96T

 IgE  兔子免疫球蛋白E  规格： 48T/96T

 IgA  兔子免疫球蛋白A  规格： 48T/96T

 Sam  兔子可溶性粘附分子  规格： 48T/96T

 sVCAM-1  兔子可溶性血管细胞粘附分子1  规格： 48T/96T

 sEPCR  兔子可溶性血管内皮细胞蛋白C受体  规格： 48T/96T

 sICAM-1  兔子可溶性细胞间粘附分子1  规格： 48T/96T

 sCD40L  兔子可溶性白细胞分化抗原40配体  规格： 48T/96T

 sP-selectin  兔子可溶性P选择素  规格： 48T/96T

 sE-selectin  兔子可溶性E选择素  规格： 48T/96T

 ANGA  兔子抗中性粒细胞颗粒抗体  规格： 48T/96T

 MIP-5  兔子巨噬细胞炎性蛋白5  规格： 48T/96T

 MIP-1α/CCL3  兔子巨噬细胞炎性蛋白1α  规格： 48T/96T

 Collagenase II  兔子胶原酶II  规格： 48T/96T

 Collagenase I  兔子胶原酶I  规格： 48T/96T

 bFGF  兔子碱性成纤维细胞生长因子  规格： 48T/96T

 T4  兔子甲状腺素  规格： 48T/96T

 TIMP-1  兔子基质金属蛋白酶抑制因子1  规格： 48T/96T

 MMP-9  兔子基质金属蛋白酶9  规格： 48T/96T

 MMP-5  兔子基质金属蛋白酶5  规格： 48T/96T

 MMP-4  兔子基质金属蛋白酶4  规格： 48T/96T

 MMP-3  兔子基质金属蛋白酶3  规格： 48T/96T

 Cr  兔子骨胶原交联  规格： 48T/96T

 T  兔子睾酮  规格： 48T/96T

 HGF  兔子肝细胞生长因子  规格： 48T/96T

 TE  兔子端粒酶  规格： 48T/96T

 CETP  兔子*酯转移蛋白  规格： 48T/96T

 MCP-1/CCL2/MCAF  兔子单核细胞趋化蛋白1  规格： 48T/96T

 PRL  兔子催乳素  规格： 48T/96T

 PRL  兔子催乳素  规格： 48T/96T

 ACTH  兔子促肾上腺皮质激素  规格： 48T/96T

 FSH  兔子促卵泡素  规格： 48T/96T

 TSH  兔子促甲状腺素  规格： 48T/96T

 LH  兔子促黄体激素  规格： 48T/96T

 LH  兔子促黄体激素  规格： 48T/96T

 E2  兔子雌二醇  规格： 48T/96T

 iFABP  兔子肠脂肪酸结合蛋白  规格： 48T/96T

 C3a  兔子补体片断3a  规格： 48T/96T

 C4  兔子补体蛋白4  规格： 48T/96T

 EGF  兔子表皮生长因子  规格： 48T/96T

 LIFR  兔子白血病抑制因子受体  规格： 48T/96T

 LTB4  兔子白三烯B4  规格： 48T/96T

 IL-4  兔子白介素4  规格： 48T/96T

 IL-3  兔子白介素3  规格： 48T/96T

 IL-2  兔子白介素2  规格： 48T/96T

 IL-1sR Ⅰ  兔子白介素1可溶性受体I   规格： 48T/96T

 IL-1β  兔子白介素1β   规格： 48T/96T

 IL-10  兔子白介素10  规格： 48T/96T

 IL-1  兔子白介素1  规格： 48T/96T

 IFN-γ  兔子γ干扰素  规格： 48T/96T

 β-TG  兔子β血小板球蛋白/β血栓环蛋白  规格： 48T/96T

 IFN-α  兔子α干扰素  规格： 48T/96T

 S-100  兔子S100蛋白  规格： 48T/96T

 S-100B  兔子S100B蛋白  规格： 48T/96T

 E-Selectin/CD62E  兔子E选择素  规格： 48T/96T

 D2D  兔子D二聚体  规格： 48T/96T

 CRP  兔子C反应蛋白  规格： 48T/96T

 Bcl-2  兔子B细胞淋巴瘤因子2  规格： 48T/96T

 PⅢNP  兔子Ⅲ型前胶原肽  规格： 48T/96T

 PⅢNT  兔子Ⅲ型前胶原氨基端肽  规格： 48T/96T

 Col Ⅲ  兔子Ⅲ型胶原  规格： 48T/96T

 Col Ⅱ  兔子Ⅱ型胶原  规格： 48T/96T

 PⅠCP  兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽  规格： 48T/96T

 Col Ⅰ  兔子Ⅰ型胶原  规格： 48T/96T

 TGFβ2  兔转化生长因子β2  规格： 48T/96T

 MHCⅡ/RLAⅡ  兔主要组织相容性复合体Ⅱ类  规格： 48T/96T

 MHCⅠ/RLAⅠ  兔主要组织相容性复合体Ⅰ类  规格： 48T/96T

 Lp-α  兔脂蛋白α  规格： 48T/96T

 Apo-E  兔载脂蛋白E  规格： 48T/96T

 apo-B100  兔载脂蛋白B100  规格： 48T/96T

 apo-A1  兔载脂蛋白A1  规格： 48T/96T

 iNOS  兔诱导型一氧化氮合成酶  规格： 48T/96T

 OSM  兔抑瘤素M  规格： 48T/96T

 AChRab  兔乙酰*受体抗体  规格： 48T/96T

 ACh  兔乙酰*  规格： 48T/96T