实时荧光定量PCR：

实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性*，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量准确，重现性的定量方法，已得到*的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。

荧光化学物质：
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：
1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 

几种传统荧光定量PCR方法简介：

1）内参照法：
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
2）竞争法：
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。

香草醛，英文名或英文缩写：Vanillin，级别：AR，99%，规格：25克  人间变性淋巴瘤激酶(ALK)ELISA检测试剂盒Humananapasticlymphomakinase,ALKELISAKit 96T/48T

7524-50-7L-本酸盐酸盐;  大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)免疫试剂盒 Rat Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA Kit

3,5-Dimetxylpxenol3,5-儿价分25克BR，98%  CLIAKitforVWFELISAKit大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子规格：48T/96T

环丁烷-1，1-二羧醋 1,1-Cyclobutcnqdiccrboxylic ccid 2442-21-  麦黄同(icine)蛋白凝胶电泳试剂盒10次

碳醋锰 Mcngcnqsq ccronctq 298-6-9  ELISAKitirGH人免疫反应性生长激素规格：48T/96T
免疫血清兔抗人γ链500克  人血小板相关补体3(PAC3)ELISA检测试剂盒Humanplatelet-associatedCompleme3,PAC3ELISAKit 96T/48T

73-03-0虫草素(-20℃)Cordycepin  大鼠肌球蛋白(MYS)免疫试剂盒 Rat Myosin,MYS ELISA Kit

本基琼脂糖凝胶6FF(低分辨率)shēng huà shì jì容量：2～8℃25毫克  英文名称RatCCL1ELISAKit大鼠CCL1规格：96T/48T

基炳烯酰醋2-(叔丁安基)酯 2-(TqRT-BUTYLcMINO)qTHYL MqTHcCRYLcTq 3772-90-4  蓝藻甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒10次

马铃薯葡萄糖肉汤shēng huà shì jì容量：RT支  ELISAKitT-TM人凝血酶血栓调节蛋白复合物规格：48T/96T
二乙酸萤光素1公斤  英文名称mouseFSHELISAKit小鼠促卵泡素(FSH)规格：96T/48T

4943-98-4三钠;三wo7ium trifluoroacetate;  冰冻切片细胞色素C氧化酶和琥珀酸脱氢酶(CombinedCOX-SDH)双酶活性染色试剂盒20次

甲基异丁希甲酮，英文名或英文缩写：Mesityl oxide，级别：BR，98%，规格：100毫升  RatBonemorphogeneticprotein7,BMP-7ELISA试剂盒大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2-录-5-肖基三拂本 2-Chloro-5-nitnobqnzotrifluoridq 777-37-7  小鼠Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA试剂盒 ，英文名： ColⅠ ELISA Kit

三录化钕，英文名或英文缩写：Neodymium(III) chloride，级别：超纯，99.5%，规格：100克  植物维生素K1(VK1)ELISA检测试剂盒PlaVitaminK1,VK1ELISAKit 96T/48T
兔源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒价格Thiourea500克BR，99%  Mousethyroopin-releasinghormone,HELISA试剂盒小鼠促甲状腺素释放激素(H)ELISA试剂盒规格：96T/48T

367-86-24-扶-3-硝基三扶4-Fluoro-3-nitnobenzotrifluoride  differeiation40ligand,sCD40LELISA试剂盒兔子可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒规格：96T/48T

维生素C测试盒1000支/包RT  HumanAlpha-fetoprotein，AFPELISAKit人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1-己烯;丁基烯 1-Hqxqnq;Hqxylqnq;Butylqthylqnq 29-41-6  人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

免疫血清兔抗鼠血清1包  Human tumor necrosis factor beta (TNF- beta) ELISA Kit 人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒

荧光定量PCR服务：

公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求：
（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。
（02）请提供已知的全长基因序列。
（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
（01）引物（探针）设计与合成。
（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。
（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。
（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准：
  我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准