班氏丝虫PCR检测试剂盒检测常见问题的常见原因

1. cDNA产量的很低可能的原因：

1) RNA模板质量低

2) 对mRNA浓度估计过高

3)反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足

4)同位素磷32过期

5)反应体积过大，不应超过50μl

2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅

1)常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系

3) 与反应起始时RNA的总量及纯度有关

4) 建议在试验中加入对照RNA

5) 第一链的反应产物在进行PCR扩增时，在总的反应体系中的含量不要超过1/10

6) 建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物（GSP）用于第一链合成。由于RNA模板存在二级结构，如环状结果，有可能导致GSP无法与模板退火；或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。

7) 目的mRNA中含有强的转录中止位点，可以试用以下方法解决：

a. 将第一链的反应温度提高至50℃。

b. 使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行第一链反应。