大鼠elisa试剂盒显色比空缺还低
时间:2018-01-23 阅读:1076
目前常用的几种大鼠elisa试剂盒方法有:测定抗体的间接法,测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。本实验采用间接法测定单克隆抗体效价。其主要过程为:首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反应板的凹孔内,加待测抗体,保温后洗涤以除去未结合的杂蛋白质,加酶标抗抗体,保温后洗涤,加底物保温30分钟后,加酸或碱终止酶促反应,用目测或光电 比色测定抗体量。
ELISA试剂盒检测系统可谓是免疫学反应应用到科研出产中zui为敏捷的技术手段。自己也为此苦恼过很长一段时间,跟着自己技术水平得进步,或多或少地也把握了ELISA体系的脾气,也是熟能生巧吧,现在做方阵,做ELISA已是轻车熟路了,以前检测一种抗体用整整一下战书还算得晕晕的,现在给我十个八个的从包被到显色,一个工作日基本搞定。可是在新老手操纵过程中老是会泛起或大或小的题目,本人在刚开始做ELISA时就面对良多灾题,固然有师兄师姐铺路,但仍是经常做得乌烟瘴气,好比说花板,假阳性,全显色,全部显色。
①抗原包被:兔抗人IgG 作为抗原,用包被液l:8000稀释,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。
②洗涤:次日倾去凹孔内的液体,洗涤液洗3次。
③封闭:加l00μL/孔封闭液,室温放置0.5h.
④洗涤:用洗涤液洗3次。
⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞培养上清在另-块板上用PBS 连续稀释(按照1:2或1:10),100μL /孔加到 已包被的板上,大鼠elisa试剂盒每个样品平行做两份,PBS或空白培养基作为阴性对照,已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育 1~2h。
⑥洗涤:用洗涤液洗3次。
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大鼠elisa试剂盒