猪ELISA试剂盒的操作步骤
时间:2016-08-22 阅读:897
猪ELISA试剂盒的操作步骤
猪ELISA试剂盒标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。用封板膜封板后置37℃温育30分钟。将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
猪ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪生长激素(GH)水平。用纯化的猪生长激素(GH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入生长激素(GH),再与HRP标记的生长激素(GH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的生长激素(GH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中猪生长激素(GH)浓度。