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RNA评价与鉴定

时间:2016-08-12      阅读:933

提取得到RNA溶液后,我们需要对RNA进行相关的质量检测,以确
定它是否符合后续实验的要求。RNA用于不同的后续实验,对其质
量要求不尽相同。cDNA文库构建要求RNA完整且无酶等抑制物残
留;Northern blot实验对RNA完整性要求较高,对酶反应抑制物残
留要求较低;RT-PCR实验对RNA完整性要求不太高,但对酶反应
抑制物残留要求严格。因此在进行不同的实验时应选择不同的方法
纯化RNA,以达的实验效果。
RNA得率检测——分光光度计法
RNA得率有很强的组织特异性,不同组织RNA的丰度和RNA提取的
难易程度共同决定了该种组织的RNA得率。一般来说,可通过分光
光度计测定RNA溶液在260nm处的吸光值来计算RNA的含量。RNA
溶液在260、320、230、280nm下的吸光度分别代表了核酸、溶液
浑浊度、杂质(多肽、苯酚等)浓度和蛋白等有机物的吸收值。用标
准样品测得在波长260nm处,1μg/ml RNA钠盐吸光度为0.025(光
程为1cm),即OD260=1时,样品中RNA浓度为40μg/ml。通常分光
光度计OD260的读数要介于0.15-1.0之间才是可靠的,因此RNA提
取结束后,要根据大概产量稀释到适当浓度范围,再用分光光度计

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