酶联免疫使用试剂盒样本前处理注意事项
时间:2015-05-13 阅读:1686
ELISA试剂盒样本前处理注意事项
3.1 均质
组织样本:肉、肝食品类切细,用绞肉机反复绞碎,混合均匀。
水产样本:去除样品的非食用部分,食用部分切细,用均质器均浆;原料表面较脏时,需适当用蒸馏水清洗。
蛋类:鲜蛋去壳,蛋黄和蛋白充分混匀。
水果、蔬菜类:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。
3.2 振荡提取
将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中,振荡,使提取溶剂与容器内的样品充分接触以深入到样本组织内部,提取待测组分。
3.2.1振荡方式:振荡器上进行上下、往返式振荡、手摇式上下振荡。
3.2.2 在组织样本中加入有机溶剂之间提取时,应边加边振荡,防止组织凝结成团,不利于提取。
3.3. 在用有机溶剂提取过程中,如果出现乳化现象,解决的方法有:①用细头轻轻的搅拌,破坏乳化后,再重复离心。②再加入适量的提取剂,重新振荡。注意离心后要保证样本的稀释倍数不变。
3.4 浓缩
由于净化过程中引入的溶剂,可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析,需要去除全部有机溶剂。即ELISA试剂盒前处理步骤中把样本在60℃氮气下吹干,再用复溶液溶解干燥残留物。
浓缩方式:
氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。
注意:
3.4.1在吹干样本之前,用甲醇清洗针头,防止杂质干扰。
3.4.2在吹样本时,针头应在液面上空,避免与样本接触,防止产生交叉污染。
3.4.3样本吹干后应立即取下,避免吹的时间过长,影响zui终检测结果。
3.4.4不同的药物,吹干后样本的保质期不同,提倡待样本回到室温后立即复溶。
3.5 净化
经过提取的待测组分中通常含有一些会干扰ELISA试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质。将待测组分与杂质分离的过程,我们称为试剂盒中样本的净化。在我们现有的试剂盒前处理方法中涉及到的zui常见的净化是:液液分配法。
比如:用复溶液溶解干燥残留物之前先加入适量的正己烷,在加入正己烷和复溶液涡动后如果出现乳化现象,可以60℃水浴加热,至乳化现象消失或减弱后,加大离心转速进行离心。