糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格
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2018-12-27 09:42:42
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产品简介

糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格公司提供的生化检测试剂,质量保证,*,欢迎广大科研用户咨询!

详细介绍

产品名称:​糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格
规格:100管/96样 
测试方法:微量法
测定意义:糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代谢的关键酶,使糖原分子从非还原端逐个断开α-1,4-糖苷键移去葡萄糖基,释放1-磷酸葡萄糖,直至临近糖原分子α-1,6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和无活性的糖原磷酸化酶b(GPb)两种形式。糖原的分解主要在GPa的催化下进行。

糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格样品测定的准备:
1、细胞、细菌或组织样品的制备 :
细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每100万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),之后置沸水浴振荡提取10min;10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。
组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。
2、血清(浆)样品:取100μL血清(浆)加入1mL提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取10分钟,10000g,常温离心10分钟,取上清,冷却后待测。
3、标准品的处理:称取1mg,将标准品稀释为15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。
糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格样品制备:
1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。
2). 过滤混浊溶液。
3). 除去样品中的CO 2 (糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格过过滤)。
4 ). 糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。
5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。
6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。
8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。
10).含脂肪的样品用热水提取。

糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。
2、取0.5mL上清液(或稀释后的标准品)+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二于有盖试管中,置沸水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。
3、待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转至试剂三;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,用试剂三调零,于520nm波长处比色,记录吸光值。
4、根据标准品吸光值和浓度,建立标准曲线。

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糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格ELISA实验糖原磷酸化酶a(GPa)试剂盒规格用规则
1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可*保存。
2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加*。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的,要在临用前现配。

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