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家蚕卵黄蛋白(LT)ELISA试剂盒试验原理

时间:2014-12-11      阅读:160

家蚕卵黄蛋白LT试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知LT浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将LT和*标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中LT的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制:

家蚕卵黄蛋白LT试剂盒成份 96孔配置 48孔配置
96/48人份酶标板 1块板(96T) 半块板(48T)
塑料膜板盖 1块 半块
标准品:100ng/ml   1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml)
空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml)
标准品稀释缓冲液 1瓶(8.0ml) 1瓶(4.0ml)
*标记的抗LT抗体 1瓶(8.0ml) 1瓶(4.0ml)
亲和链酶素-HRP 1瓶(12ml) 1瓶(5ml)
洗涤缓冲液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml)
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml)
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml)
终止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml)
家蚕卵黄蛋白LT操作步骤: 
1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

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