elisa测定试剂盒原理与组成结构的几点
时间:2021-01-08 阅读:617
elisa测定试剂盒使用原理:
elisa测定试剂盒技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何的诊断试剂离不开的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。
elisa测定试剂盒组成结构:
一、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热量和肉毒素的试管。收集血液后,1000*g离心10分钟将血红细胞迅速小心的分离。
二、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
三、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
四、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
五、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
elisa测定试剂盒试剂盒成分:
一、预包被板: 抗小鼠Elisa试剂盒-6兔子IgG,亲合纯化 96T
二、 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
三、标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
四、 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
五、 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
六、显色剂: TMB底物液 15mL x 1
七、终止液: 1N硫酸 12mL x 1
八、浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)