elisa检测试剂盒检测原理：

elisa检测试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。胰岛素捕获抗体已预包被于酶标板上，当同时加入标本或参考品和HRP耦连的抗抗体时，其中的不同位点会与捕获抗体和HRP的抗抗体结合，形成夹心复合物，锚定在固相载体板上，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。后加入显色剂，若样本中存在将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中浓度

elisa检测试剂盒准备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（-20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。 正常标本测定前用 标本 稀释液作 1： 1 0 稀释（取 2 0ul，加 标本 稀释液 18 0ul,稀释 1 0倍）。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 2 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，第一管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入elisa检测试剂盒标本稀释液 500ul 。在第一管中加入 2 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二 管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

elisa检测试剂盒检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液elisa检测试剂盒将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入第一抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗处反应15 分钟。

8.  每孔加入100ul 终止液混匀。

9.  30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。