根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，ELISA试剂盒可设计出各种不同类型的检测方法：双抗体夹心法、双抗体夹心法、间接法测抗体、竞争法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和*的ELISA。
●酶标抗体保护液的优化
低浓度的酶标抗体极容易受到高温、微生物、以及蛋白酶的影响而失活，严重影响产品的货架期，过去通常将酶标抗体冻干保存，然而这样的保存，ELISA试剂盒不仅由于在冻干的过程中会影响酶标抗体的活性，而且在临床应用中颇为不便。适当的缓冲液以及添加无关蛋白质、糖、防腐剂以及一些含氨基的化合物等都会对对酶标抗体的活性起一定的保护作用，因此我们设计了一组保护剂用于保护酶标抗体，与未添加任何糖蛋白的酶标抗体做对照，将经保护的酶标抗体及未保护的酶标抗体置于37℃烘箱中放置6天，考察保护液对酶标抗体的影响。
●包被缓冲液的优化
包被抗原时，为了得到*的包被效果，我们采用了碳酸盐缓冲液(50mM ph9.6)、磷酸盐缓冲液(50mM ph7.6)、以及TRIS盐酸缓冲液(50 mM ph7.6)三种缓冲液作为包被液，抗原包被浓度为5ug/ml，及2.5ug/ml,酶标抗体工作浓度为1：400及1：300，选择*的包被缓冲液系统。同时为了保证缓冲液能够长期保存，我们在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作为防腐剂。
●zui适抗原包被浓度的优化
用优化好的包被缓冲液，将包被抗原(ALB)稀释成0.1ug/ml，1.0ug/ml，2.0ug/ml，4.0 ug/ml，6.0 ug/ml，8.0 ug/ml，10.0 ug/ml等六个浓度，包被微孔板，每孔100ul;竞争抗原浓度为4.0 ug/ml，2.0 ug/ml;酶标抗体稀释度为1：300，经孵育、显色、终止后用自动酶标仪分析。显色的强度在一定范围内与包被的抗原量成正比，但随着包被抗原浓度的增加，显色的强度反而降低，我们选择临界包被值作为包被抗原量。
●标准品及样品稀释液：我们采用10mM的磷酸盐缓冲液内含0.5%的BSA作为标准品及样品的稀释液。
●剂量反应曲线的建立及曲线拟合方式的确定
在其他参数均已经优化完成的情况下，ELISA试剂盒将抗原标准品用标准品稀释液依次稀释为：160mg/L,80mg/L，40mg/L，20mg/L，10mg/L，5mg/L，2.5mg/L，1.25mg/L，0.625mg/L，0.3125 mg/L，0.156 mg/L，0.780 mg/L等12个稀释度，同时设置阴性和空白对照，加入已包被好抗原的酶标板中，同时加入酶标抗体，经孵育、显色、终止后用自动酶标仪分析，采用文献报道的4P对数拟合曲线。