ELISA试剂盒了解

试剂盒组成：

封板膜:2片（48）/2片（96）

说明书:1份

密封袋:1个

标准品：   2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶  2-8℃保存

酶标包被板:  1×48     1×96         2-8℃保存

样品稀释液: 3ml×1瓶  6 ml×1瓶     2-8℃保存

显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存

显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存

终止液:     3ml×1瓶 6ml×1瓶     2-8℃保存

浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人*2(VD2) 水平。用纯化的人*2(VD2) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入*2(VD2) ，再与HRP标记的*2(VD2) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的*2(VD2) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人*2(VD2) 浓度。

ELISA试剂盒操作步骤

标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

ELISA试剂盒计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。