绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)水平。用纯化的绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Ⅱ型胶原(ColⅡ)，再与 HRP标记的Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB在   HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)呈正相关。用酶标仪在 450nm  波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)浓度。
试剂盒组成
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8条
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
终止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2   酶标试剂
标准品（16µg/L）
标准品稀释液
3   酶标包被板
4   样品稀释液
5   显色剂 A液
6   显色剂 B液
10   说明书
11   封板膜
12   密封袋
2张
1个
标本要求绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因   NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
8.0µg/L
4.0µg/L
2.0µg/L
1.0µg/L
0.5µg/L
5号标准品
4号标准品
3号标准品
2号标准品
1号标准品
150µl的原倍标准品加入  150µl标准品稀释液
150µl的  5号标准品加入  150µl标准品稀释液
150µl的  4号标准品加入  150µl标准品稀释液
150µl的  3号标准品加入  150µl标准品稀释液
150µl的  2号标准品加入  150µl标准品稀释液
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液    50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与  OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本  OD值大于标准品孔*孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月