新年ELISA试剂盒操作步骤进行测定
时间:2015-02-11 阅读:398
因此有些厂家为了保持较好的本底采用了单片段基因工程抗原及合成肽包被,该类试剂盒的流行病学敏感度不够,稳定性也成问题。也有厂家坚持试剂盒高的流行病学敏感度,科学地对待反应结果。ELISA试剂盒基因工程抗原是抗原基因在质粒载体中原核或真核表达的蛋白质抗原,多以大肠杆菌或酵母菌为表达系统。
该类抗原与合成肽相比具有以下特点:分子量大。合成肽采用化学方法制备,由于工艺的局限,合成数量有限,只能达到数百个氨基酸;而利用基因工程制备的抗原,分子量更大。良好的ELISA试剂盒板应该是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之间和同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA试剂盒板由于配料的不同和制作工艺的差别,各种产品的质量差异很大。因此每一批号的聚苯乙烯制品在使用前须检查其性能。
常用的检查方法为:以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA试剂盒板各孔后,每孔内加入适当稀释的酶标抗人IgG抗体,保温后洗涤,加底物显色,终止酶反应后分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件,使各读数在0.8左右。计算所有读数的平均值。所有单个读数与平均读数之差应小于10%.与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。作为ELISA试剂盒固相载体,聚氯乙烯板的特点为质软板薄,可切割,价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有时也略高。
为比较不同固相在某一ELISA试剂盒测定中的优劣,可用以下方法加以检验:用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和一个典型的阴性标本。将它们分别进行一系列稀释后,在不同的固相载体上按预定的ELISA试剂盒,然后比较测定结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果判别zui大,这种载体就是这一ELISA试剂盒测定的zui合适的固相载体。