在做ELISA试剂盒实验过程中，难免会遇到各种不同的问题，比如标准曲线不好，试剂盒的回收率，假阴性，假阳性，实验的重复性不好等等。现在就来一一解答用户们在实验过程中遇到的各种疑问！
ELISA试剂盒曲线问题： 

1.OD值不正常

试剂盒未回温，试剂盒回温到25℃

温度控制不好，控制正确温度

孵育时间不准确，控制孵育时间

洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增 加，洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干

阳光直射，对着风直接吹，避风避

酶标仪的波长错误，ELISA试剂盒酶标仪的波长450nm

抗体的稀释错误，正确的稀释抗体

水质问题，用娃哈哈矿泉水代替

2.白   板

洗涤液配制错误，正确的配制洗涤液

少加液体（错加液体），正确的步骤加液体

3.无 梯 度

标准品也污染，换标准品点板

OD值不正常，控制温度时间在做一次

人为点板，不要点板

4.线 性 不 好

OD值不正常，控制温度时间在做一次

ELISA试剂盒回收率

1.空白管阳性高

样本本身就是阳性样本，换阴性样本做回收率

空白管在实验中被污染，实验中防止交叉污染

水质原因用，娃哈哈矿泉水代替

2.偏  高

添加量不准确，的添加量

添加浓度不适合，添加合适的浓度

取液吹干量多，准确的取液吹干

取到其它相层液体，取需用相吹干

复溶液未稀释或加入量少，正确的稀释复溶液

ELISA试剂盒3.偏  低

添加量不准确，的添加量

添加浓度不适合，添加合适的浓度

取液吹干量少，准确的取液吹干

复溶液稀释错误或加入量多，正确的稀释复溶液

假阴、阳性

1，水质原因：点复溶液验证，用娃哈哈矿泉水代替

2，实验操作原因

吸取到其它相吹干，准确的取液吹干

离心不*，延长离心时间

样本的污染，更换样本

乳化未处理*，温浴（70℃）处理乳化现象

3，仪器试剂原因

离心管未清洗干净，正确的洗涤器具

有机溶剂的影响，ELISA试剂盒做试剂空白看影响结果

4，衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质）,更换衍生化试剂

5，与曲线好坏相关,，保证曲线的正常