细胞：HFLS-RA细胞

中文名称：人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞

生长特性：贴壁

培养基：DMEM-H培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

HFLS-RA细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

鼻疽假单胞菌(BM)核酸扩增检测

实验目的:适用于检测人或动物(马、骡、驴等)血液、呼吸道分泌物、皮肤溃疡分泌物及疑似动物肺脏及肠系膜淋巴结等组织标本中鼻疽假单胞菌(BM)DNA，适用于鼻疽假单胞菌(BM)感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。

实验原理：本试剂盒选取一对鼻疽假单胞菌(BM)特异性引物和一条特异性荧光探针，通过碱裂解法提取鼻疽假单胞菌(BM)DNA，后者在耐热DNA聚合酶(Taq酶)作用下，配以FQ-Buffer(内含MgP2+P、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分，通过PCR-荧光探针体外扩增法对鼻疽假单胞菌(BM)进行扩增，从而达到实时快速定量检测之目的。

实验组成：

名      称数      量规      格

（核酸提取液B 4管 500μl/管）（Taq酶系 1管 80μl/管）（BM PCR MIX 1管 960μl/管）

（BM 阳性质控品 1管 50μl/管(1×10P7Copies/ml)）（阴性质控品 1管 500μl/管）

备注：10×RCLB另行配备。

结果判定：

测定结果的计算：

如果Ct值﹤38，则实验样品的BM DNA含量(基因拷贝数/ml)= Qty-Copies/ml；

如果38﹤Ct值﹤40，为灰区建议重新检测，重新检测若38﹤Ct值﹤40判为阳性，否则为阴性。

如果Ct值=40，则BM DNA含量（基因拷贝数/ml）﹤1×10P2PCopies/ml (低于检测下限)。