F98细胞培养(大鼠胶质瘤细胞)
时间:2024-03-17 阅读:150
细胞:F98细胞
中文名称:大鼠胶质瘤细胞
生长特性:贴壁
培养基:DMEM-L培养基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
F98细胞传代:
1):细胞密度约80%时,吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意根据实际情况,把握消化时间)。
2):镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时;
(可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处,即可肉眼可见细胞层脱落,或吹打后镜下观察吹打处,即消化完成,否则继续消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。
3):取部分细胞悬液转移到新的培养皿中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。
4):注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。
(网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;)
禽白血病病毒(ALV)核酸扩增检(PCR-荧光探针法 )DNA提取
样品处理:
羽髓、肝脏、脾脏、淋巴结、骨髓及肿瘤等固体组织:
用研磨器充分研磨,取约50mg转至一洁净的1.5ml离心管中。取50μl左右组织匀浆转移到1.5mL的EP管中,加入50μl核酸提取液B(提取液内含不溶物质,使用前室温解冻并充分混匀),充分混匀。100℃处理10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
血清、培养物、体液等液体标本:
取50μl液体标本,加入加50μl核酸提取液B(提取液内含不溶物质,使用前室温解冻并充分混匀),充分混匀。100℃处理10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
阴性质控品:
取50 μl阴性质控品加入50μl核酸提取液B,充分震荡。后100℃裂解10分钟,然后13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
ALV-阳性质控品:
直接取4μl进行PCR扩增。或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。