细胞：FL62891细胞

中文名称：人肝细胞

生长特性：贴壁

培养基：DMEM-H培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

FL62891细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

基因分型(AIV)核酸扩增检测

实验目的：用于检测发病动物体液、咽或泄殖腔试子或肺脏、淋巴结等组织标本以及细胞培养液中病毒RNA，适用于病毒(通用型、H5型、H7型和H9型)等感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

实验原理：用四对病毒(通用型、H5型、H7型和H9型)特异性引物，Trizol提取RNA，经逆转录酶作用将RNA转录成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以SD-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分，通过PCR-体外扩增法对病毒RNA进行扩增，产物经凝胶电泳，溴化乙锭(EB)染色，紫外灯观察，从而达到快速检测之目的。

适用标本类型：发病动物体液、咽或泄殖腔试子或肺脏、淋巴结等组织标本；病毒细胞培养液。

组织标本采集：取发病动物肺、肝、脾、肺、肾、淋巴结及胰腺等组织约1g，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。

体液及培养液体标本采集：取上述标本约1ml，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。

咽及泄殖腔等试子标本采集：用棉试子取咽或泄殖腔分泌物，将试子放入盛有1.0ml PBS(或生理盐水)的离心管中，立即送检。

保存和运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。