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产品名称:人芳香烃受体(AhR)ELISA试剂盒
别名:人芳香烃受体(AhR)ELISA Kit
供货商:上海远慕
保存:2到8度低温
产品规格:96T/48T
经营种类:进口分装和原装、国产。
预期应用:ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。
试剂盒成分:酶标板,试剂,标准品等。
适应种属:人,大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭ELISA试剂盒等种属。
引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。
试验原理:
人芳香烃受体(AhR)ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)。已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将已知浓度的标准品和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
包含以下各组分:
(1)结合物及标本的稀释液;
(2)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;
(3)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(4)酶的底物;
(5)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),ELISA试剂盒参考标准品和控制血清(定量测定中);
(6)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
液体类标本:
包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1)血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5)组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
人ELISA试剂盒现货性能:
1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2.灵敏度:zui低检测浓度小于10pg/ml。
3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
人芳香烃受体(AhR)ELISA检测试剂盒注意事项:
1.试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品,其他成分不可冻结。
2.浓缩生物素化人IL-2抗体,浓缩酶结合物体积小,运输中颠簸和可能的倒置,会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000rpm离心1分钟,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,使结晶*溶解后再配制洗涤液。
4.测试过程中,人IL-2冻干标准品为一次性使用,不得分装。因其浓度较低,溶解两小时候后,会迅速失活。
5.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
6.配制试剂时,要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂,充分混匀对测试结果尤为重要,使用微量振荡器(使用zui低频率),如无微量振荡器,可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟,例如做圆周动作,使加入孔中的反应液混匀。
7.实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作,并在使用前充分预热。
8.酶免试验中人IL-2标准品和样本检测时建议作复孔。
9.将不用的微孔板放进原铝箔袋中,置2-8℃保存。
10.显色液对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
11.超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中。
12.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,波长应该设置为450nm和630nm.
13.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸,使用时必须注意安全。
14.各步骤加样均应使用加样器,并经常校准其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
15.每次试验测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔zui高浓度的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
16.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
17.以洗板机洗板时,每孔注液量不应少于350μl, 注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时, 用带纸屑的吸水材料应慎重, 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应。
18.用终止液终止反应后,请于10分钟内读取OD值。
19.进行复孔实验时,结果计算一定要求平均值。
20.标本溶血可能会有假阳性结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
21.试验时,应该将加过样品的板条放于密闭盒内,并保持湿度约60%左右。
22.为保证恒温箱内的温度为37℃,恒温箱的温度要经常校准。以确保实验温度保持恒定。
23.48T的试剂盒,所有组分均为96T的50%的量。
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