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大鼠红细胞生成素(EPO)Elisa试剂盒

时间:2014-11-12      阅读:122

大鼠红细胞生成素(EPO)Elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠红细胞生成素(EPO)水平。用纯化的大鼠红
细胞生成素(EPO)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入红细胞生
成素(EPO),再与 HRP 标记的红细胞生成素(EPO)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合
物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作
用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的红细胞生成素(EPO)呈正相关。用酶标仪在
450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠红细胞生成素(EPO)浓度。

大鼠红细胞生成素(EPO)Elisa试剂盒操作步骤
1.
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
24IU/L
5 号标准品
150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
12IU/L
4 号标准品
150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
6ng/L
3 号标准品
150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
3ng/L
2 号标准品
150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
1.5ng/L
1 号标准品
150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,
然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.
温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.
配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6.
加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7.
温育:操作同 3。
8.
洗涤:操作同 5。
9.
显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。

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