人H1N1神经氨酸酶抑制剂(NAIs)Elisa试剂盒
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144次人H1N1神经氨酸酶抑制剂(NAIs)Elisa试剂盒操作步骤
1.
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
240pg/ml
5 号标准品
150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
120pg/ml
4 号标准品
150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
60pg/ml
3 号标准品
150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
30pg/ml
2 号标准品
150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
15pg/ml
1 号标准品
150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2.
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,
然后再加待测样品 10µl(样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.
温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.
配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6.
加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
7.
温育:操作同 3。
8.
洗涤:操作同 5。
9.
显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
人H1N1神经氨酸酶抑制剂(NAIs)Elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 H1N1 神经氨酸酶抑制剂 (NAIs)水平。用纯
化的人 H1N1 神经氨酸酶抑制剂 (NAIs)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微
孔中依次加入 H1N1 神经氨酸酶抑制剂 (NAIs),再与 HRP 标记的 H1N1 神经氨酸酶抑制剂
(NAIs)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB
在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中
的 H1N1 神经氨酸酶抑制剂 (NAIs)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD
值),通过标准曲线计算样品中人 H1N1 神经氨酸酶抑制剂 (NAIs)浓度。
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