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人α干扰素(IFN-α)Elisa试剂盒

时间:2014-12-10      阅读:280

人α干扰素(IFN-α)Elisa试剂盒操作步骤

  1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

32μg/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

16μg/L

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

8μg/L

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

4μg/L

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

2μg/L

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

 

  1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  2. 温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。  
  3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  6. 温育:操作同3
  7. 洗涤:操作同5
  8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.
  9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  10. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

人α干扰素(IFN-α)Elisa试剂盒计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度

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