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兔抗人血清抗体的制备和效价测定的实验原理

时间:2014-04-08      阅读:1002

兔抗人血清抗体的制备和效价测定的实验原理
       凡能刺激机体产生抗体,并能与抗体发生特异性结合的物质称为抗原。物质所具有的这种特性称为抗原性(Antigenicity)。当机体受抗原刺激后,在体液中出现的一种能与相应抗原发生反应的球蛋白,称免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)。含有免疫球蛋白的血清称免疫血清。
       医学上常见的抗原物质,种类很多,如病原微生物及其代谢产物(毒素),异种动物血清(各种抗毒素,免疫血清的来源),同种血型抗原,同种异体皮肤,器官等组织抗原,自身组织抗原,肿瘤细胞抗原。具有抗原性的各种化学成分有蛋白质、脂蛋白、多糖体、脂多糖、糖蛋白、多肽以及核蛋白等,这些抗原物质均可刺激机体产生抗体或细胞免疫反应。
      机体在抗原物质的刺激下产生特异性免疫反应的过程,大体上可分为3个阶段。
      1.致敏阶段(加工处理抗原阶段):当颗粒性抗原初次进入人体内时,首先被巨噬细胞吞噬(可溶性抗原可直接被T淋巴细胞吞饮,多糖与鞭毛抗原物质可直接作用于B淋巴细胞)。通过巨噬细胞浆内溶酶体酶的作用,把抗原物质消化降解,而保留其抗原决定簇(特异性抗原成分)。经过加工处理的抗原分子结构比原来的小,抗原性却比原来的加强。当处理过的抗原与巨噬细胞的RNA结合成为抗原-RNA复合物(抗原信息),就具有强烈吸引免疫活性细胞的作用,能把抗原-RNA复合物传递给免疫活性细胞(Immunologically competent cell),启动免疫反应。
      2.反应阶段(淋巴细胞分化增殖阶段):免疫活性细胞在受到抗原信息的刺激后,发生母细胞化,进而大量增殖。由于抗原的性质不同,刺激T细胞分化成致敏淋巴细胞。抗原信息刺激B细胞使分化成浆细胞。在分化过程中小部成为“记忆”细胞。由于“记忆”细胞的存在,即使抗原在浆内消失很久(数月至数年或更长)以后,仍能与再度进入体内的相应抗原迅速引起较强的免疫反应(回忆反应)。
     3.效应阶段(发生免疫反应阶段):当致敏淋巴细胞再次遇到相应抗原的刺激后,能释放出多种具有生物活性的物质(淋巴因子),参与细胞免疫反应;浆细胞可形成各种类型的免疫球蛋白(抗体),参与体液免疫反应。
在免疫期间,不仅各个不同的动物,而且同一动物在不同的时间内抗血清效价、特异性、亲合力等都可能发生变化,因而必须经常地采血测试。只有在对抗血清的效价、特异性、亲合力等方面作*的评价后,才可使用所取得的抗血清。
兔抗人血清的效价,就是指血清中所含抗体的浓度或含量。效价测定的方法常用的是放射免疫法,此法对所有的抗体均适用。某些由大分子(如蛋白类)抗原所产生的抗体,可用双扩散等方法测定。本实验采用双向免疫扩散法测定效价。
 

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