人血清IGE检测方法
时间:2014-03-17 阅读:995
IgE和IgG4(以下只用IgE代表)是介导Ⅰ型变态反应的抗体,因此检测人血清总IgE和特异性IgE对Ⅰ型变态反应的诊断和过敏原的确定很有价值。
总IgE的测定
测定方法
正常情况下血清IgE仅在ng/ml水平,用常规测定IgG或IgM的凝胶扩散法检测不出IgE,必须用高度敏感的放射免疫测定法及酶联免疫测定法进行检测。
1.放射免疫吸附剂试验(radioimmunosorbenttest,IRST)是将抗IgE吸附到固相载体上用以检测血清IgE的方法,故又称固相放射免疫测定(SPRIA);临床常用双抗体夹心法,多以滤纸为载体。将抗IgE抗体偶联到经溴化氟活化的滤纸上,使其与待检血清及IgE参考标准进行反应;洗涤后加入125I标记的抗人IgE,再经洗涤后测定滤纸片的放射活性,其测定值与标本中的IgE含量呈正相关。
2.酶联免疫测定法测定血清IgE时也常用双抗体夹心ELISA法,操作方便,敏感性也很高,在临床上经常应用。
3.间接血凝试验用抗IgE至敏红细胞,将标本血清做系列稀释后与致敏红细胞反应。此法更加简便易行,便于普及,但敏感性比上两法稍低。
人血清特异性IgE的测定
测定方法
特异性IgE是指能与某种过敏原特异性结合的IgE,因此需要用纯化的变应原代替抗IgE进行检测;常用的方法仍然是放射免疫技术和酶标免疫技术。
1.放射变应原吸附剂试验(radioallergosorbenttest,RAST)将纯化的变应原与固相载体结合,加入待检血清及参考对照,再与同位素标记的抗IgE抗体反应,然后测定固相的放射活性,通过标准曲线求出待检血清中特异性IgE的含量,或在标本放射活性高于正常人均数加3S时判为阳性。
2.酶联免疫测定法试验原理及步骤基本同RAST,仅是zui后加入酶标记的抗IgE,利用酶底物进行显色。测定结果的表示也与RAST相同。