细胞放在显微镜下观察，细胞无污染、退缩，等其长满培养瓶约70%-80%时即可进行传代操作，具体步骤如下：

1、 打开瓶盖，弃上清,2.D-HANK‘S夜（以50ml培养瓶为例，下同）

2、吸管清洗后弃之；

3、加0.25%胰酶2吸管；

4、轻摇晃后置入37度温箱；

5、3-5分钟后置显微镜下观察，见细胞胞质退缩，变圆；

6、吸去胰酶，加含10%FCS的RPMI1640 3吸管；

7、用洗管吹打，见细胞脱落，培养液变混，即可吸出加到新的培养瓶中。

注意事项：若胰酶消化超过时间，见细胞已漂浮，切不可直接倒去上清，可直接加等量的含10%FCS的RPMI1640，吹打后加到离心管中离心5分钟，再弃上清，加入培养基进行传代。