一、实验前将所有试剂平衡至室温，包括样本、TMB(非常重要)。

二、强烈建议老师在操作ELISA试剂盒的时候每个样本包括标准品做复孔(请务必这样操作)，因为这样可以,求平均值，确保实验结果的准确性对试剂盒的性能进行评估对自己的操作进行评估解决跳孔。

三、为保证老师ELISA试剂盒实验结果准确 ，其中几点重要的操作注意事项请务必参考：

如果以下表述与说明书中不一致，请按照实验对应说明书的要求操作 。

1、标准品溶解：标准品溶解严格按照说明书进行操作，建议老师进行标准品稀释时，在EP管中进行。

2、孵育：说明书中进行孵育的时候，一定要用微孔板振荡器振荡，这个很重要，利于抗原抗体充分结合。

3、洗板：建议按照说明书操作，每次洗涤至少洗液浸泡30s，重复6次，洗板时间太短、次数太少会导致实验效果 不佳，延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。

四、如何控制标曲显色(仅针对双抗夹心法ELISA试剂盒)5 - 30分钟显色时间为经验范围，每个具体的实验，可根据以下情况，确定大致的显色时间：

1) 肉眼观察：标曲S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止。

2) 仪器判断：630 nm左右波长下，标曲S1孔的OD值达到0.5 - 0.7、S5孔的OD值达到0.05 - 0.08、Blank孔的OD 值小于0.05时，即可终止。

3) 高敏系列试剂盒因灵敏度更高，需严格控制显色时长，可较普通试剂盒适当缩短显色时间。