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晶抗生物关于流式细胞仪你了解多少?做详细分解!

时间:2023-02-02      阅读:910

流式细胞是一种对溶液中单个细胞或颗粒进行快速、多参数分析的技术。流式细胞仪利用激光作为光源,照射在细胞上,产生散射光和荧光信号,由检测器如光电二极管或光电倍增管读取。之后,这些信号被转换成电子信号,由计算机进行分析,并写入标准格式(.fcs)数据文件。另外,细胞群可以根据其荧光或散射光的特性进行分析或分选。


用于流式细胞术的仪器在过去的几十年里不断“进化”着,以满足越来越多的科研与临床应用需求。晶抗生物将为大家简单介绍几种流式细胞仪。

传统流式细胞仪:传统的流式细胞仪由液流、光学和电子(检测分析)三个系统组成。液流系统主要由鞘液(通常是一种缓冲盐水溶液)构成。在一定压力下,鞘液将细胞或颗粒聚焦在一条直线,并将其输送到激光拦截点。


光学系统:

由激发光 (激光器)和收集光 (光电倍增管或PMTs和光电二极管)组成,产生用于分析样品的散射光和荧光信号。一系列的双色向滤光片可引导荧光到特定的探测器,以便每一个单独的荧光色素可以被检测和测量。更具体地说,双色向滤光片只允许波长较短或较长的光通过,并以一定角度反射不能通过的光。例如,450双色向长通滤光片(DLP)让波长大于450 nm的光通过滤光片,并以一定角度反射较短波长的光,发送到另一个探测器。带通滤光片只允许一定波长范围内的荧光通过。例如,450/50带通滤光片只允许波长为450 +/- 25 nm的荧光通过。


电子系统:

电子系统将探测器发出的信号转换成可以被计算机读取的数字信号。常见的多激光系统通常有20个参数(FSC, SSC和18个荧光探测器)。目前,一些新的仪器正在引入5个或更多的激光器,并设置30-50个参数,但这并不常见。传统流式细胞仪使用的常见的激光是488 nm(蓝色)、405nm(紫色)、532nm(绿色)、552nm(绿色)、561 nm(绿)、640 nm(红色)和355 nm(紫外线),还有一些不常见的激光可用于特定用途。此外,还有一些仪器已经用电子崩光电二极管(APD)取代光电倍增管(PMT)用于荧光检测,目的是提高检测的灵敏度。





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