要使 ELISA试剂盒 测定得到精确的成果，不论是定性的仍是定量的，必须严格按照规定的办法制备试剂和施行测定。主要试剂的制备关键已如前述，其他一般性试剂，如包被缓冲液、洗刷液、标本稀释液、结合物稀释液、底物工作液和酶反响停止液等，制造时不行掉以轻心。

 

在ELISA试剂盒中除了包被外，一般需进行45加样。在定性测定中有时不强调加样量的精确性，例如规定为加样一滴。此刻应该运用相同口径的滴管，保持精确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求精确。标本和结合物的稀释液应按规定制造。加样时应将液体加在孔底，防止加在孔壁上部，并留意不行出现气泡。

 

如阴性对照色彩极浅，在定性测定中一般可采用目视比色。如用比色计测定成果，精确性决议于ELISA板底的平坦与透明度和比色计的质量。

 

 

洗刷在ELISA试剂盒过程中不是反响聚，但却是决议试验成败的关键。洗刷的意图是洗去反响液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反响过程中非特异性吸附于固相载体的搅扰物质。聚苯乙烯待塑料对蛋白质的吸附效果是普遍性的。因此在ELISA试剂盒测定的反响过程中应尽量防止非特异性吸附，而在洗刷时又应把这种非特异性吸附的搅扰物质洗刷下来。在标本和结合物的稀释液和洗刷液中参加聚山梨酯一类物质即右达到此意图。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，为非离子型的表面张力物质，常作为助溶剂。依据脂肪酸的品种而对聚山梨酯编号，结合月桂酸的为聚山梨酯20，在ELISA中zui为常用。它的洗刷效果好，并具有减少非特异性吸附和增强抗原抗体结合的效果。

 

洗刷如不*，特别在zui后一次，如有酶结合物的非特异性吸附，将使空白值升高。另外，在间接法中如血清标本内的非特异性IgG吸附在固相上而未被洗净，也将与酶标抗体效果而产生搅扰。

ELISA板的洗刷一般可采用以下办法：①吸干孔内反响液;②将洗刷液注满板孔;③放置2min，略作摇摆;④吸干孔内液，也可倾去液体后在吸水纸上拍干。洗刷的次数一般为3～4次，有时甚至需洗5～6次。

 

在ELISA试剂盒中一般有二次抗原抗体反响，即加标本后和加结合物后，此刻反响的温度和时刻应按规定的要求，保温容器是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA板不该叠在一同。为防止蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。湿盒应该是金属的，传热容易。如用保温箱，空湿盒应预先放在其中，以平衡温度，这在室温较低时更为重要。参加底物后，反响的时刻和温度通常不做严格要求。如室温高于20℃，ELISA板可避光放在试验台上，以便不时调查，待对照管显色适其时，即可停止酶反响。