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牛甲状腺素(T4)ELISA分析试剂盒说明书
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上海闳巨优惠供应牛甲状腺素(T4)ELISA分析试剂盒说明书,并提供试剂盒价格、用途、规格、实验原理、说明书、相关实验操作等详细信息。闳巨牛甲状腺素(T4)ELISA分析试剂盒说明书等各种ELISA试剂盒均采用的是定量夹心酶联免疫技术。抗体具体为FGF6已经被预先涂到微孔板。标准和样品吸入井和任何FGF6目前被绑定的固定化抗体。*共轭的抗体特异性FGF6除去任何未结合的物质后,加入到孔中。抗*蛋白共轭的辣根过氧化物酶(HRP)的洗涤后,加入到孔中。经过洗涤,以除去任何未结合的抗*蛋白的酶试剂,底物溶液加入到孔中,显色成比例的量的初始步骤中的约束的FGF6。彩色显影被停止并测量的颜色的强度。
此种方法ELISA试剂盒,具有较高的灵敏度和特异性好,检测鼠标FGF6。观察鼠标FGF6和类似物之间无显著交叉反应或干扰。
【操作步骤】
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 待测样本孔先加待测样本10μL,再加*40μL;
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
【结果判断】
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
【试剂盒性能】
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 ng/L。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
【ELISA试剂盒组成部分】
试剂盒组成 | 48 孔配置 | 96 孔配置保存 |
说明书 | 1份 |
|
封板膜 | 2 片(48) | 2 片(96) |
密封袋 | 1个 | 1个 |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 |
标准品 | 225nmol/L 0.5ml×1 瓶 | 0.5ml×1 瓶 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1 瓶 | 1.5ml×1 瓶 |
酶标试剂 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 |
样品稀释液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 |
显色剂A液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 |
显色剂B液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 |
终止液 | 3ml×1 瓶 | 6ml×1 瓶 |
浓缩洗涤液 | (20ml×20 倍)×1 瓶 | (20ml×30 倍)×1 瓶 |
【注意事项】
⑴ 严格按照牛甲状腺素(T4)ELISA分析试剂盒说明书说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30~60min。
⑵ 加样后及时放人孵箱。标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。
(3)封板温育时,各孔一定要封严,防止阳性标本的液体蒸发,产生周边现象从而导致“花板”的出现。
(4)用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干:还要防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。
(5)合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
(6)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
(7)显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
(8)加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。
(9)应保证C清洁,整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。
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