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目前使用的酶联免疫检测方法很多,其中小鼠Ubelisa试剂盒按检测目的可分为:
间接法——用于测定抗体
双抗体夹心法——主要用于测定大分子抗原
竞争抑制法——主要用于测定小分子抗原
小鼠Ubelisa试剂盒的分类:
1.双抗体夹心法测抗原
双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法,操作步骤如下:
1)将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2)加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
3)加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。
2.双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。
3.间接法测抗体
间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(抗*抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。
4.竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,zui后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
5.ABS-ELISA法
ABS为亲和素(avidin)*(biotin)系统(system)的略语。亲和素是一种糖蛋白,分子量60000,每个分子由4个能和*结合的亚基组成。*为小分子化合物,分子量244。用化学方法制成的衍*-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成*标记产物,标记方法颇为简便。
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