神经母细胞瘤

神经母细胞瘤
胰蛋白酶溶液的配制与消毒：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在 pH为 8.0、温度为 37℃时，胰酶溶液的作用能力zui强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的 BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。

称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为 0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调 PH到 7.2左右）或 PBS（D-hanks）液中。搅拌混匀，置于 4℃内过夜。

用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22 微米微孔滤膜）抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
在细胞冻存时加入温保护剂，能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。

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类杆菌-胆汁-七叶甙（BBE）琼脂 BBE Agar 用于脆弱拟杆菌群的分离培养
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