KC 培养基

KC 培养基特殊培养法

二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为：

1.吸除旧培养液注入另瓶中。

2.用温BSS冲洗1次。

3.用0.25%温*消化，加入消化液量以仅覆盖细胞层即可；作用1~5分钟。

4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1新旧混合）。

5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。

6.按一分为二比例接种培养。

使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法：

1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞，90%汇合时制成细胞悬液，再按105细胞/毫升重新接种培养。

2.在细胞半汇合时，准备0.25μg/ml的丝裂霉素C，按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜；或用射线单次照射，剂量30～50戈瑞。

3.细胞经上述处理后，Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时，*消化细胞制成悬液，按5×104（104细胞/cm2）接种入新KC 培养基中。

4.48小时后，即可用于细胞克隆之用。

KC 培养基细胞分离（克隆）培养

多孔塑料培养板单细胞克隆法：

1.消化：取健康待克隆细胞，吸出瓶内培养液，加消化液。

2.低密度细胞悬液的制备：做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液，然后稀释细胞，使之成为1~2细胞/毫升悬液，zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。

3.接种：先用吸管轻轻吹打细胞悬液，使混悬均匀，继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确，争取在zui短时间内加完，以免培养液蒸发，然后迅速盖好盖板，置CO2温箱培养。

4.标记：培养6~12小时后，待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后，从温箱中取出，置倒置光显微镜台上，观察和标记下含有单个细胞的孔，置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液，只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基，但不要吸除过多，余少许，以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液，继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时，可进行分离培养。

5.分离扩大培养：培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用Hanks洗1~2次，继加*少许，加入量已能覆盖细胞群即可，如过多，应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视，待发现细胞变圆时，加入0.1ml含10%血清的克隆培养基，用吸管轻轻吹打，当细胞离开底物悬浮后，一并吸入管内，移入另瓶或皿中，再补加一定量克隆培养液，置CO2温箱中继续培养、增殖，使之形成新的细胞群后，即转用常规培养法培养。

KC 培养基相关产品如下：hz1257    Preston肉汤基础    250g    用于空肠弯曲杆菌的选择性增菌
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验培养基            
hz1261    改良克氏双糖铁培养基    250g    生化培养基，用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的生化反应筛选
hz1262    改良Y培养基    250g    用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌 （GB标准）
hz1263    ITC肉汤    250g    用于分离培养耶尔森氏菌（ISO方法）
hz1264    SSDC培养基（ISO）    250g    用于小肠结肠耶尔森氏菌的分离培养
hz1265    CIN-1培养基基础    250g    用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌 （GB标准）
支原体检测培养基            
hz1271    支原体培养基基础（含*）    250g    用于培养支原体的基础培养基
hz1272    支原体琼脂培养基    250g    用于培养支原体的基础培养基
hz1273    支原体肉汤培养基    250g    用于培养支原体的基础培养基
hz1274    支原体琼脂培养基（含*）    250g    用于支原体的增菌培养
hz1275    支原体肉汤培养基（不含琼脂和酚红）    250g    用于支原体的增菌培养
hz1276    PPLO琼脂    250g    用于支原体分离和培养的基础培养基
hz1277    PPLO肉汤    250g    用于培养支原体的基础培养基
hz1278    支原体半流体培养基    250g    用于培养支原体的基础培养基
军团菌检测培养基            
hz1281    GVPC琼脂基础    100g    用于军团菌的选择性分离培养(ISO标准)
hz1282    BCYE琼脂基础    100g    用于军团菌的选择性分离培养(ISO标准)
hz1283    BCYE-CYS琼脂基础    100g    用于军团菌的选择性分离培养(ISO标准)
hz1284    硝酸铁琼脂    250g    用于军团菌的选择性分离培养(ISO标准)
啤酒检验培养基            
hz1290    MRS琼脂    250g    用于啤酒中乳酸菌总数测定
hz1291    UBA培养基    250g    用于啤酒中厌氧菌检测
hz1292    NBB培养基    250g    用于啤酒中厌氧菌检测
hz1293    RaKa-Ray培养基    250g    用于啤酒中乳酸菌检测和分离培养
无菌检验培养基            
hz1011    溴甲酚紫葡萄糖肉汤    250g    用于低酸性罐头食品商业无菌检验
hz1005    锰盐营养琼脂    250g    用于嗜热需氧芽孢杆菌的检验
hz1168    卵黄琼脂基础    250g    加入卵黄，用于厌氧梭状芽孢杆菌的分离培养
hz1019    酸性肉汤培养基    250g    用于酸性缺罐头食品商业无菌检验
hz1022    麦芽浸膏汤    200g    用于酸性罐头食品商业无菌检验
hz1215    疱肉培养基基础    250g    加入牛肉粒，用于肉毒梭菌及厌氧梭状芽孢杆菌的检验
hz1216    疱肉牛肉粒    100g    加入疱肉基础，配成疱肉培养基
hz1298    *肉汤    250g    用于消毒剂效果检测
植物细胞培养基