厌氧菌肉汤MIC

厌氧菌肉汤MIC特殊培养法

二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为：

1.吸除旧培养液注入另瓶中。

2.用温BSS冲洗1次。

3.用0.25%温*消化，加入消化液量以仅覆盖细胞层即可；作用1~5分钟。

4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1新旧混合）。

5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。

6.按一分为二比例接种培养。

使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法：

1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞，90%汇合时制成细胞悬液，再按105细胞/毫升重新接种培养。

2.在细胞半汇合时，准备0.25μg/ml的丝裂霉素C，按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜；或用射线单次照射，剂量30～50戈瑞。

3.细胞经上述处理后，Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时，*消化细胞制成悬液，按5×104（104细胞/cm2）接种入新厌氧菌肉汤MIC中。

4.48小时后，即可用于细胞克隆之用。

厌氧菌肉汤MIC细胞分离（克隆）培养

多孔塑料培养板单细胞克隆法：

1.消化：取健康待克隆细胞，吸出瓶内培养液，加消化液。

2.低密度细胞悬液的制备：做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液，然后稀释细胞，使之成为1~2细胞/毫升悬液，zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。

3.接种：先用吸管轻轻吹打细胞悬液，使混悬均匀，继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确，争取在zui短时间内加完，以免培养液蒸发，然后迅速盖好盖板，置CO2温箱培养。

4.标记：培养6~12小时后，待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后，从温箱中取出，置倒置光显微镜台上，观察和标记下含有单个细胞的孔，置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液，只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基，但不要吸除过多，余少许，以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液，继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时，可进行分离培养。

5.分离扩大培养：培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用Hanks洗1~2次，继加*少许，加入量已能覆盖细胞群即可，如过多，应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视，待发现细胞变圆时，加入0.1ml含10%血清的克隆培养基，用吸管轻轻吹打，当细胞离开底物悬浮后，一并吸入管内，移入另瓶或皿中，再补加一定量克隆培养液，置CO2温箱中继续培养、增殖，使之形成新的细胞群后，即转用常规培养法培养。

厌氧菌肉汤MIC相关产品如下：hz1301    MS培养基     250g     用于植物组织培养的基础培养基 
hz1302    1/2MS培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1303    1/4MS培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1304    B5培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1305    N6培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1306    NLN培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1307    white培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1308    NS培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1309    NB培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1310    RNS培养基     250g     用于植物的组织培养 
hz1311    DPD培养基     250g     用于植物组织的培养 
hz1312    WPM培养基     250g     用于植物组织的培养 
hz1313    MT培养基     250g     用于植物组织的培养 
hz1314    C81V培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1315    改良MS-H培养基     250g     用于植物组织培养 
hz1316    knudson C 培养基     250g     用于兰花组织培养 
动物细胞培养基            
hz1331    BME    250g     含Earle's盐和L-*，不含*
hz1332    BME（可高压灭菌）    250g     含Earle's盐，不含L-*和*
hz1333    DMEM(低葡萄糖）    250g     含1000mg/L D-葡萄糖、L-*和110mg/L丙酮酸钠，不含*
hz1334    DMEM(高葡萄糖）    250g     含4500mg/L D-葡萄糖和L-*，不含*
hz1335    DMEM（高葡萄糖）    250g     含4500mg/L D-葡萄糖和L-*，不含酚红、丙酮酸钠和*
hz1336    DMEM（高葡萄糖）    250g     含4500mg/L D-葡萄糖、L-*和25mM HEPES，不含丙酮酸钠和*
hz1337    DMEM（HED）    250g     改良DMEM，具有较强细胞维持能力，可增加收液次数，提高病毒表达率
hz1338    DMEM/F-12    250g     含15mM HEPES、L-*、盐酸吡哆醇、盐酸吡哆醛，不含*
hz1339    DMEM/F-12    250g     含L-*、盐酸吡哆醇和盐酸吡哆醛，不含HEPES和*
hz1340    IMDM    250g     含25mM HEPES和L-*，不含α-硫代丙醇、β-巯基乙醇和*
hz1341    E199    250g     含Earle's盐和L-*，不含*
hz1342    H199    250g     含Hanks'盐和L-*，不含*
hz1343    MEM    250g     含Earle's盐和L-*，不含*
MAC144    MEM    250g     含Hanks'盐和L-*，不含*
hz1345    MEM    250g     含L-*，不含*
hz1346    MEM    250g     含Earle's盐、L-*和非必需氨基酸，不含*
hz1347    MEM    250g     含Hanks'盐、L-*和非必需氨基酸，不含*