BDS 培养基

BDS 培养基特殊培养法

二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为：

1.吸除旧培养液注入另瓶中。

2.用温BSS冲洗1次。

3.用0.25%温*消化，加入消化液量以仅覆盖细胞层即可；作用1~5分钟。

4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1新旧混合）。

5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。

6.按一分为二比例接种培养。

使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法：

1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞，90%汇合时制成细胞悬液，再按105细胞/毫升重新接种培养。

2.在细胞半汇合时，准备0.25μg/ml的丝裂霉素C，按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜；或用射线单次照射，剂量30～50戈瑞。

3.细胞经上述处理后，Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时，*消化细胞制成悬液，按5×104（104细胞/cm2）接种入新BDS 培养基中。

4.48小时后，即可用于细胞克隆之用。

BDS 培养基细胞分离（克隆）培养

多孔塑料培养板单细胞克隆法：

1.消化：取健康待克隆细胞，吸出瓶内培养液，加消化液。

2.低密度细胞悬液的制备：做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液，然后稀释细胞，使之成为1~2细胞/毫升悬液，zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。

3.接种：先用吸管轻轻吹打细胞悬液，使混悬均匀，继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确，争取在zui短时间内加完，以免培养液蒸发，然后迅速盖好盖板，置CO2温箱培养。

4.标记：培养6~12小时后，待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后，从温箱中取出，置倒置光显微镜台上，观察和标记下含有单个细胞的孔，置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液，只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基，但不要吸除过多，余少许，以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液，继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时，可进行分离培养。

5.分离扩大培养：培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用Hanks洗1~2次，继加*少许，加入量已能覆盖细胞群即可，如过多，应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视，待发现细胞变圆时，加入0.1ml含10%血清的克隆培养基，用吸管轻轻吹打，当细胞离开底物悬浮后，一并吸入管内，移入另瓶或皿中，再补加一定量克隆培养液，置CO2温箱中继续培养、增殖，使之形成新的细胞群后，即转用常规培养法培养。

BDS 培养基相关产品如下：hz1104    MKTTN肉汤基础    250g    用于沙门氏菌选择性增菌培养(ISO标准)，已加入新生霉素，无需另行加入
    Muller-KauMFFAn Tetrathionate Novobiocin Broth Base        
hz1105    乳糖肉汤（LB）    250g    用于食品中沙门氏菌检验前增菌
    Lactose Broth        
hz1106    赖氨酸铁琼脂    250g    用于赖氨酸、硫化氢试验
    Lysine Iron Agar        
hz1107    EF-18琼脂    250g    用于滤膜法筛选食品中沙门氏菌，使用前加入无菌过滤的新生霉素，zui终浓度0.015g/L（SN/T 1059.1）
    EF-18 Agar        
hz1108    RVS肉汤    250g    用于沙门氏菌选择性增菌培养(ISO标准)
    Rappaport-Vassiliadis Soya Broth        
*检测培养基            
货号    产品名称    规格    产品说明与用途
hz1015    胰蛋白胨大豆肉汤    250g    用于*的MPN测定，增菌培养，NaCl浓度可根据需要而调整（GB，SN标准）
    Trypticase (Tryptic) Soy Broth        
hz1072    Baird-Parker琼脂基础    250g    用于*的选择性分离培养（GB，SN，FDA标准）
    Baird-Parker Agar Base        
hz1073    改良Giolitti-Cantoni肉汤    250g    用于*的增菌培养（ISO标准）
    Giolitti-Cantoni Broth        
hz1074    7.5%氯化钠肉汤    250g    用于*的增菌培养（GB标准）
    7.5% Sodium Chloride Broth        
hz1007    营养肉汤培养基    250g    用于*的增菌培养（SN标准）
    Broth Medium        
hz1111    亚碲酸钠肉汤培养基基础    250g    用于*增菌培养，每100ml 培养基需另加入1%亚碲酸钠1ml
    Yolk lurite Broth Base        
hz1112    葡萄球菌增菌肉汤    250g    用于凝固酶阳性葡萄球菌的选择性增菌
    Staphylococcus Enrichment Broth        
hz1113    葡萄球菌选择性琼脂    250g    用于凝固酶阳性葡萄球菌的选择性分离培养
    Staphylococcus Selective Aga        
hz1114    卵黄*高盐琼脂基础    250g    用于食品中*的选择性分离培养
    Egg-Manitol Salt Agar        
hz1115    血液琼脂基础    250g    供分离营养要求较高的致病菌用，后加血液制成血平板
    Blood Agar Base        
hz1020    脑心浸出液肉汤    250g    用于营养要求较高的微生物的培养
    Brain Heaet Infusion Broth