AN 厌氧肉汤基础

AN 厌氧肉汤基础特殊培养法

二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为：

1.吸除旧培养液注入另瓶中。

2.用温BSS冲洗1次。

3.用0.25%温*消化，加入消化液量以仅覆盖细胞层即可；作用1~5分钟。

4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1新旧混合）。

5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。

6.按一分为二比例接种培养。

使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法：

1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞，90%汇合时制成细胞悬液，再按105细胞/毫升重新接种培养。

2.在细胞半汇合时，准备0.25μg/ml的丝裂霉素C，按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜；或用射线单次照射，剂量30～50戈瑞。

3.细胞经上述处理后，Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时，*消化细胞制成悬液，按5×104（104细胞/cm2）接种入新AN 厌氧肉汤基础中。

4.48小时后，即可用于细胞克隆之用。

AN 厌氧肉汤基础细胞分离（克隆）培养

多孔塑料培养板单细胞克隆法：

1.消化：取健康待克隆细胞，吸出瓶内培养液，加消化液。

2.低密度细胞悬液的制备：做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液，然后稀释细胞，使之成为1~2细胞/毫升悬液，zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。

3.接种：先用吸管轻轻吹打细胞悬液，使混悬均匀，继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确，争取在zui短时间内加完，以免培养液蒸发，然后迅速盖好盖板，置CO2温箱培养。

4.标记：培养6~12小时后，待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后，从温箱中取出，置倒置光显微镜台上，观察和标记下含有单个细胞的孔，置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液，只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基，但不要吸除过多，余少许，以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液，继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时，可进行分离培养。

5.分离扩大培养：培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用Hanks洗1~2次，继加*少许，加入量已能覆盖细胞群即可，如过多，应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视，待发现细胞变圆时，加入0.1ml含10%血清的克隆培养基，用吸管轻轻吹打，当细胞离开底物悬浮后，一并吸入管内，移入另瓶或皿中，再补加一定量克隆培养液，置CO2温箱中继续培养、增殖，使之形成新的细胞群后，即转用常规培养法培养。

AN 厌氧肉汤基础相关产品如下：hz1050    肠道菌增菌肉汤(EE)     250g    用于肠道菌的增菌培养（GB标准）
    Enterobacteria Enrichment Broth        
hz1051    西蒙氏枸橼酸盐琼脂     250g    用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验（GB标准）
    Simmons Citrate Agar        
hz1052    麦康凯琼脂    250g    用于革兰氏阴性肠道杆菌的分离
    MacConkey Agar        
hz1053    麦康凯琼脂NO3    250g    用于革兰氏阴性肠道杆菌的分离
    MacConkey Agar NO3        
hz1054    *麦康凯琼脂基础     250g    用于大肠杆菌O157的分离培养（SN标准）
hz1055    Sorbitol Maconkey Agar Base        
hz1057    Honda氏产毒肉汤基础    250g    用于致泻大肠埃希氏菌的产毒培养（GB标准）
    Honda Toxin-Producing Broth Base        
hz1058    Elek氏培养基    250g    用于致泻大肠埃希氏菌的毒素测定（GB标准）
    Elek Medium        
hz1059    缓冲MUG琼脂    100g    用于滤膜/MUG法检测食品中大肠杆菌数（SN/T1059.2）
    Buffer MUG Agar        
hz1060    缓冲MUG肉汤    100g    用于滤膜/MUG法检测食品中大肠杆菌数（SN/T1059.2）
    Buffer MUG  Broth        
hz1061    Koser氏枸橼酸盐肉汤    100g    用于大肠埃希氏菌检测
    Koser Citrate Medium        
hz1062    Columbia-MUG琼脂培养基    100g    用于荧光法大肠杆菌的测定（SN）
    Columbia-MUG Agar        
hz1014    胰蛋白胨大豆琼脂    250g    用于坂崎肠杆菌色素生成试验（FDA方法）；也可用于一般细菌的培养、转种、复壮等
    Trypticase (Tryptic) Soy Agar        
hz1064    改良胰蛋白胨大豆肉汤（mTSB）    250g    用于食品和动物饲料中大肠杆菌O157的增菌培养（SN，ISO标准）
    Tryptic Soy Agar Modified        
hz1065    TB培养基    250g    用于基因工程菌大肠杆菌培养，营养丰富
    Terrific Broth        
hz1066    SB培养基    250g    用于基因工程菌大肠杆菌培养，营养非常丰富
    Super Broth        
hz1067    SOB培养基    250g    用于基因工程菌大肠杆菌培养
    SOB Medium        
hz1068    SOC培养基    250g    用于基因工程菌大肠杆菌培养
    SOC Medium