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兔抗鸡IgY抗体
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详细信息
兔抗鸡IgY抗体（antibody，Ab）是机体免疫系统受到抗原刺激后产生的特异性球蛋白，称免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)。根据其重链稳定区的分子结构和抗原性的不同，可将为类Ig分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等五大类。由遗传基因决定所产生的抗体，称天然抗体（natural antibody），由抗原激发免疫细胞产生的抗体，称免疫抗体（immune antibody）或称特异地性抗体。人工制备的特异性抗体又可分为多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体三种类型。
兔抗鸡IgY抗体抗血清的鉴定
抗血清的效价可根据抗体的不同性质，分别采用环状沉淀试验、琼脂双向扩散、单向免疫扩散、溶血试验、凝集反应、酶免疫反应及放射免疫等方法进行测定。检查抗血清的纯度可采用免疫电泳、琼脂双向扩散及交*反应试验等方法检测。
1)取适量Protein A+G Beads悬液，装入层析柱，用10倍柱体积的PBS（或者TBS，下同）洗涤平衡层析柱。
2)含抗体的血清或其它体液高速离心后，将上清与等体积2×PBS缓冲液混合，调整pH以及离子浓度后(确认pH值为7±0.5)，缓慢加入层析柱。
3)用10倍柱体积以上的PBS洗涤，至流出液无蛋白检出。
4)加入2倍柱体积0.1 M 柠檬酸（Citrate Acid, pH 2.7）封闭流出管，静置5分钟后收集穿出液，重复三次。测定 OD280估算抗体浓度，如果所得抗体较多可以使用SDS-PAGE检测纯度。也可以选择0.1 M*（Glycine, pH 3.0）洗脱。
5)洗脱后的抗体立即加入2/5体积的1 M Tris，pH 9.0中和，使用Millipore蛋白浓缩管切换到所需缓冲液，或者透析，缓冲液通常为PBS含有0.02% NaN3以及1 mM EDTA。
6)浓缩到所需体积，加入50%甘油；测定效价后，分装并保存在-20℃，避免冻结。
兔抗鸡IgY抗体的特异性是指对相应抗原或近似抗原物质的识别能力。特异性高，抗体识别能力就强，通常以交*反应率来表示。交*反应率可用竞争抑制试验测定。
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