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钙激活钾通道蛋白抗体
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详细信息
钙激活钾通道蛋白抗体（antibody，Ab）是机体免疫系统受到抗原刺激后产生的特异性球蛋白，称免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)。根据其重链稳定区的分子结构和抗原性的不同，可将为类Ig分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等五大类。由遗传基因决定所产生的抗体，称天然抗体（natural antibody），由抗原激发免疫细胞产生的抗体，称免疫抗体（immune antibody）或称特异地性抗体。人工制备的特异性抗体又可分为多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体三种类型。
检测病原体常用的钙激活钾通道蛋白抗体有人工制备的特异性多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体三种类型。
操作步骤：
1取适量Protein A+G Beads悬液，装入层析柱，用10倍柱体积的PBS（或者TBS，下同）洗涤平衡层析柱。
2含抗体的血清或其它体液高速离心后，将上清与等体积2×PBS缓冲液混合，调整pH以及离子浓度后(确认pH值为7±0.5)，缓慢加入层析柱。
3用10倍柱体积以上的PBS洗涤，至流出液无蛋白检出。
4加入2倍柱体积0.1 M 柠檬酸（Citrate Acid, pH 2.7）封闭流出管，静置5分钟后收集穿出液，重复三次。测定 OD280估算抗体浓度，如果所得抗体较多可以使用SDS-PAGE检测纯度。也可以选择0.1 M*（Glycine, pH 3.0）洗脱。
5洗脱后的抗体立即加入2/5体积的1 M Tris，pH 9.0中和，使用Millipore蛋白浓缩管切换到所需缓冲液，或者透析，缓冲液通常为PBS含有0.02% NaN3以及1 mM EDTA。
6浓缩到所需体积，加入50%甘油；测定效价后，分装并保存在-20℃，避免冻结。
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