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支原体检测试剂盒
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上海邦景实业有限公司(Shanghai Bangjing Industrial Co., Ltd.,China)是一家生物企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的销售。主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。
上海邦景实业有限公司(Shanghai Bangjing Industrial Co., Ltd.,China)先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学,暨南大学,南京工业大学,曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研ELISA试剂盒,种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒;另有针对各种动物(鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼)的科研试剂。
公司秉承“专注品质、信守承诺、积极沟通、创新服务”的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务,力求为我国科研事业更好的,更专业的服务!
公司售后服务宗旨:有质量问题可申请退换,有技术疑问可随时给于解答,一对一的客服服务,客户的需求也是我们不断的更新服务。
中文名称:支原体检测试剂盒
英文名称:Mycoplasma Detection Kit
产品规格:100T-200T
产品货号:BJ-01X6479
本试剂盒是利用荧光染料检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富集区域,因为支原体的DNA中A-T含量高(55%~80%),所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点,即为支原体的DNA染色斑,说明有支原体污染。Hoechst 33258的大激发波长为346nm,大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后,大激发波长为352nm,大发射波长为461nm。 操作步骤: 贴壁细胞: 1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中,接种密度为1-2×104。同时,接种正常无支原体感染的同种细胞,作为阴性对照。 2.5天后,先吸去培养液,再加入1ml的固定液,静置20min, 3.吸去固定液,晾干。 4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15-20min或室温静置20~30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml灭菌超纯水洗涤三次,直接风干。风干后加入一滴封片液,并以盖玻片覆盖。 6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。 悬浮细胞: 1.收集需检测的细胞,1500rpm,5min。 2.将收集的细胞涂片于载玻片上,再加1ml的固定液,静置20min。 3.吸去固定液,晾干。 4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15~20min或室温静置20~30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液,用无菌水洗涤玻片3次,直接风干。风干后加入一滴封固液,并以盖玻片覆盖。 6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。 |
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
Rhizomucor miehei米黑根毛霉探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Fructus arctii牛蒡子探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Human Coronavirus(HCoV-NL63)人NL63 染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Fructus trichosanthis瓜蒌PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Herba lophatheri淡竹叶探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Strongyloides edentatus无齿类圆线虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Trichophyton rubrum红色毛癣LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Norwalk Viruses(NV)诺如病毒通用RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
貂源性成分LAMP试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Aspergillus nidulans构巢曲霉探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Diarrheagenic Escherichia coli致泻性大肠杆(致泻性大肠埃希氏)通用染料法荧光定量PCR试剂盒(停) 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Mycobacterium marinum海鱼分枝杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周
支原体检测试剂盒GST(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升
体液WNV(WEST NILE)病毒定性检测试剂盒 20次
V-J琼脂培养基(USP) 英文名称:Vogeljohnson Agar Medium 产品规格:250g
4%中性多聚甲醛固着液 50毫升
沙氏葡萄糖液体培养基 英文名称:Sabouraud’s Glucose Broth Medium 产品规格:250g
蛋白电泳染色试剂专题
连续循环比色法定量检测试剂盒
组织科萨基病毒B(Coxsackievirus B)定量PCR扩增检测试剂盒 20次
高盐琼脂 英文名称:Mannitol Salt Agar 产品规格:250g
细胞INSULIN R-ALPHA 蛋白表达比色法定量检测试剂盒 10/50 次
3%NaCl阿拉伯糖 英文名称: 产品规格:20支
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)