大鼠ELISA检测试剂盒

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    中文名：大鼠ELISA试剂盒

    别名：大鼠ELISA Kit

    产品规格：96T/48T

    保存条件：2-8℃低温保存

    保质期：6个月，所有试剂盒均提供批次。

    试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。

    检测波长：450nm

    所需样本体积：50-100ulv

    优点：灵敏性高、特异性强、重复性好。

    检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本

    用途：仅用于科研，不适合临床

    特点：

    一、高效、灵敏、特异的抗体；

    二、稳定的重复性和可靠性；

    三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

    四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

    五、节省实验经费。

    操作步骤：

    1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

    2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

    3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

    4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

    5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

    6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

    7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

    8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

    9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

    大鼠ELISA试剂盒建议使用的实验方案：

    6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

    洗板方法

    1.  手工洗板方法：吸往（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上展垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注进孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。

    2.  自动洗板：假如有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

     大鼠ELISA试剂盒技术原理：

    1.抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

    2.结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

    3.酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

    4.受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。

    5.此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

    6.加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

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