Ounuo98006 T-2毒素ELISA快速检测试剂盒

T-2毒素ELISA快速检测试剂盒

T-2 TOXIN ELISA Kit

(货号：Ounuo98006)

一、原理

T-2毒素ELISA快速检测试剂盒，采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物T-2毒素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争T-2毒素抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物T-2毒素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物T-2毒素的含量。

二、试剂盒特性

1）灵 敏 度： 0.05ppb

2） 孵育温度： 25℃

3） 孵育时间： 30min～15min

4） 样本检测下限

饲料、花生、大米 ········ 3 ppb

5） 交叉反应率

T-2 毒素 ··············· 99.9%

6） 样本回收率

饲 料 ·············· 90±25%

花 生 ················ 85±25%

大 米 ················ 90±25%

三、、样本前处理步骤

1） 样本处理前须知

（a）实验中必须使用一次 头，吸取不同试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

2） 样本前处理需配制：

配液1 样本复溶液：

将离子水与5×浓缩复溶液按4：1稀释。

配液2 样本提取液：

将样本复溶液与 按1：1比例混合均匀。

3） 样本处理：

（a） 饲料、花生、大米样本处理方法：

1、 取1.0±0.05g粉碎后的样本于50ml离心管中；加入5ml样本提取液，充分振荡3min，20℃ 4000r/min以上离心10min；

2、 取上清100μl，加入400μl样本复溶液，充分振荡混匀；

3、 取50μl用于分析。

样本稀释倍数：25倍

六、 酶标免疫分析程序:

1） 测定前应须知：

1、 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温（20～25℃）。

2、 使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。

3、 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、 所有恒温孵育过程，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。

2） 操作步骤：

1、 从2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、 取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

3、 配液：将15ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。

4、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、 加标准品/样本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗体工作液，用盖板膜盖板，轻轻振荡混匀，25℃环境反应30min。

6、 将孔内液体甩干，用稀释后的洗涤液250μl/孔洗板4～5次，每次间隔15～30秒，用吸水纸拍干（拍干后未清除的气泡可用干净的 头刺破）。

7、 显色：加入底物A液50μl/孔，再加入底物B液50μl/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。

8、 测定：加入终止液50μl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，5min内读数），测定每孔OD值。

七、结果判定

结果判定有两种方法，粗略判定可用yi种方法，定量判定用 种方法。注意样本吸光度值与其所含T-2毒素量成负相关。