大鼠肠平滑肌细胞

细胞简介：

大鼠小肠平滑肌分离自小肠组织；小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连，是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠、空肠和回肠三部分。小肠内消化是至关重要的，因为食物经过小肠内胰液、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机械性消化后，基本上完成了消化过程，同时营养物质被小肠粘膜吸收了。小肠管壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜构成。其结构特点是管壁有环形皱襞，粘膜有许多绒毛，绒毛根部的上皮下陷至固有层，形成管状的肠腺，其开口位于绒毛根部之间。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切；构成肠腺的细胞有柱状细胞、杯状细胞、潘氏细胞和未分化细胞。柱状细胞和内分泌细胞与绒毛上皮相似，接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似，绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短，不形成纹状缘。小肠有三种功能即消化、吸收和分泌及运动功能，其中以吸收和分泌功能为主。平滑肌细胞的收缩是负责肠蠕动的动力，促使食物向下运动。小肠平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。小肠平滑肌肉瘤是起源于小肠壁肌层、黏膜下肌层和肠壁血管平滑肌的恶性肿瘤，是小肠结缔组织恶性肿瘤中常见的一种。因此，体外小肠平滑肌细胞的培养对研究小肠平滑肌肉瘤提供了基础和前提。此外，体外培养细胞，由于影响因素较为单一，是研究细胞功能以及相应的细胞信号转导机制的基础。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠肠平滑肌采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠肠平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的产品：

大鼠骨成型蛋白3(BMP-3)试剂盒 ，英文名： BMP-3 ELISA Kit

Rabbit ierleukin 1 beta (IL-1 beta) ELISA Kit 兔子白介素1β (IL-1β)试剂盒

3型脊髓灰质病毒(PV-3)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMIS/AMH(HumanMullerianInhibitingSubstance/Ai-Mullerianhormone)ELISAKit人缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素

体液碱性0酸酶活性比色法定量试剂盒20次

ELISAKitE2犬雌二醇

转基因植物NOS基因核酸试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

转基因植物NOS基因核酸试剂盒   48T

转基因植物PAT基因核酸试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

转基因植物PAT基因核酸试剂盒   48T

20号染色体开放阅读框202抗体

猪胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA 试剂盒

Human leinizing hormone releasing hormone (LHRH) ELISA Kit 人黄体生成素释放激素(LHRH)试剂盒

Rabbitniicoxidesyhase,NOSELISAKit 兔合成酶(NOS)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAP(HumanAprotinin)ELISAKit人

血清样品液相法去内毒素试剂盒20次

PorcineIerleukin12,IL-12/P40ELISAKit猪白介素12(IL-12/P40)试剂盒

中性粒细胞弹性蛋白酶ELANE抗体

NRP1重组食蟹猴 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白  Protein

IL-23(Interleukin-23 0.5mgIL-23(Interleukin-23) 白介素-23抗原

GRK6重组人 GRK6 / GPRK6 蛋白 (His & GST 标签) Protein

BPHL Protein Human 重组人 BPHL 蛋白 (His 标签)

MCAM Protein Mouse 重组小鼠 CD146 / MCAM 蛋白 (His 标签)

大鼠肠平滑肌细胞IL-23(Interleukin-23 0.5mgIL-23(Interleukin-23) 白介素-23抗原

BPHL Protein Human 重组人 BPHL 蛋白 (His 标签)

NRP1重组食蟹猴 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白  Protein

MCAM Protein Mouse 重组小鼠 CD146 / MCAM 蛋白 (His 标签)

GRK6重组人 GRK6 / GPRK6 蛋白 (His & GST 标签) Protein