肝素亲和素填料使用

肝素亲和素填料使用

产品 介绍

Heparin NUPharose FF和 Heparin NUPharose HP是肝素亲和填料， 是 在 纽龙生物经典的琼脂糖凝胶层析介质基球 NUPharose上键合 肝素 而成。 FF为 Fast Flow的缩写，具备快流速的特点，可用于快速纯化蛋白质，适用性广，易于放大。 HP为 High Performance的缩写，具备分辨率高的特点。 肝素亲和的原理较为复杂， 一般认为 肝素与蛋白的结合是离子相互作用、氢键与 范德华力 等多种驱动力共同作用的结果。 肝素填料 主要用于凝血酶 III、凝血因子、脂蛋白、酯酶、激素、干扰素等的分离纯化。 也有 文献报道将肝素填料用于外泌体的纯化。产品保留了琼脂糖极好的亲 水性及大网架结构，与生物活性大分子有很好的相容性，具有载量高，非特异性吸附少，流速快等特点， 适用于各种肝素亲和层析。

使用方法 参考

1、色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。

1 所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

2）填料 用量计算： 通过沉降定量填料体积， 需要的沉降 填料 体积 =柱体积× 压缩比（也称压缩因子） 。 沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降 完全 读取的稳定体积。 Heparin NUPharose FF的压缩比为 ~1.15 Heparin NUPharose HP的压缩比为 ~1.20。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，也可以通过高流速 压柱。

3）填料 清洗： 将 填料 悬液充分摇匀后量取 相应体积， 抽去液体，并用约 3倍填料体积的 纯化水洗涤，重复 3次 ，以除去保存液 。

4）装柱 填料 悬液准备：将 填料 转移 到 适当的容器中，加入 适量的装柱液， 制成50~75 v%的装柱 填料 悬液 原包装中填料体积 分数 为 使用前 搅匀。

5 装填 前准备： 在 清洗干净的层析柱 下端加入 装柱液 ，以除去 下垫片及层析柱下端 的空气，在柱内保留少量的蒸馏水 拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。

6 装填 将搅匀后的 填料 悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器）为避免引 入气泡 ，应使之沿层析柱内壁自然流下 。 将所有填料加入后， 用装柱液将装柱器加满，拧紧装柱器上盖，将 柱子 与层析系统连接。

7）压柱：使柱内填料自然沉降（或 50~150 cm/h的 低 流速下沉降），待填料沉降完全后（填料与液体的界面清晰），去除 装柱器 装上上柱头， 并 将柱头下降至 界面 处通过 高 流速（ 推荐流速见下表， 注意 柱压不超过 0.3 MPa 继续 压柱至 界面 清晰稳定，标记 界面 稳定时的柱高。 停泵，打开柱头上的阀门 /堵头，关闭柱底的阀门 /堵头，下压柱头至标记位置 下方与压缩比对应的位置 ，旋紧柱头，装柱完成。 装柱完成后，需 用高流速平衡柱内的填料 。

填料保存

填料的初始保存液为 20%乙醇， 含 50 mM醋酸钠 使用过后可继续用 相同的保存液 。 保存温度在 4~8 ℃为宜 不可冻存 。

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