LiP木质素过氧化物酶检测试剂盒微量法

产品属性：

商品介绍：

测定意义

木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

测定原理

木质素过氧化物酶催化天青脱甲基，在651nm处测定吸光值减少。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。
产品内容：

公司产品仅用于科研酸性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；

碱性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 1.5mL×1 支，4℃保存

试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 1.6mL 双蒸水，混匀，4℃保存一周；

试剂四：粉剂×1 支，4 ℃保存，用时加入 1.9mL 双蒸水，混匀，4℃保存一周；

试剂五：液体 0.7mL×1 支，4 ℃保存；

试剂六：液体 10mL×1 瓶，4 ℃保存；

试剂七：自备。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸馏水充分混合备用。

NAD 标准品：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水，即 2umol/mL，将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。

NADH 标准品：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水，即 2umol/mL，将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NADH 标准溶液备用。

操作步骤：

一、NAD+和 NADH 的提取：

1、血清（浆）中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.5mL 酸性提取液，煮沸 5min (盖紧，以防止水分 散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min；取上清 200uL，加入等体积碱性提取液；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。

NADH 的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.5mL 碱性提取液，煮沸 5min(盖紧，以防止水分 散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积酸性提取液；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

2、组织中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防 止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积碱性提取液混匀， 10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

NADH 的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 碱性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防 止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积酸性提取液混匀， 10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 酸性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％ 或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200uL 另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4℃ 离心 10min，取上清,冰上保存待测。

NADH 的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 碱性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％ 或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200uL 另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4℃ 离心 10min，取上清,冰上保存待测。

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注意事项：

1、操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加，必须分开加。

2、反应过程要注意避光。

3、当吸光值大于 1 时，建议稀释后测量，计算公式中应当乘以稀释倍数。