森贝伽-TC、TG实验方法
时间:2016-12-22 阅读:308
森贝伽-TC、TG实验方法
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一、组织样本
1、同样还是用等渗缓冲液,按重量体积1:9,制备匀浆,2500rpm*10min,取上清即10%匀浆用于TG、TC的测定(提取的不*,但也能测定)
2、用有机溶剂提取,a:用无水乙醇作匀浆介质,按上面方法制备匀浆待测,提取效果比等渗缓冲液好;
b:用特殊有机溶剂提取(如绿仿甲醇混合液等)提取效果好,但由于高挥发,测定不准确,所以一般需用N2吹干后用无水乙醇复溶后进行测定。
二、培养细胞
1、用PBS洗细胞
2、加入500ul乙醇,使之铺满培养皿,培养皿内的细胞泛白时把培养皿斜放,用细胞刮板将细胞刮下来,使细胞浸泡在乙醇中
3、用移液器把细胞和乙醇移到玻璃匀浆器中,碾磨3分钟成悬液
4、收集悬液,4000rpm*10min离心,取上清50ul测定
三、奶样
新鲜或者冻存的奶样本,用无水乙醇按照不同比例进行提取(奶样:无水乙醇=1:1、1:4、1:9、1:19、1:49、1:99)充分漩涡混匀2分钟,4000转/分离心10分钟,取上清按操作表操作。按稀释度、结果做浓度曲线,取直线线性段的浓度为宜。